论文部分内容阅读
目的:通过葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导建立大鼠腹泻模型,以疾病活动指数（DAI）评分、结肠切片、炎症因子表达水平、氧化应激状态、肠道菌群为观察指标,评价穿王消炎粉对大鼠结肠炎的治疗作用,为研发国家级新兽药—穿王消炎粉提供临床依据。方法:将36只大鼠随机分为6组,分别为:空白对照组、DSS结肠炎模型组、阳性对照组以及穿王消炎粉低、中、剂高剂量组,每组6只。空白对照组大鼠连续7 d自由饮用高压灭菌水,其他组的大鼠则自由饮用4%DSS水溶液,所有大鼠自由采食。模型建立成功后,阳性对照组和穿王消炎粉低、中、高剂量组采用灌胃方式每天给药一次,给药体积为2 m L,给药浓度为阳性对照组-柳氮磺吡啶30 mg/m L、穿王消炎粉低、中、高剂量组分别为100、200、400 mg/m L,模型组和空白对照组灌服等体积的蒸馏水,连续灌胃7 d。结果:1.对大鼠一般状态和DAI评分的影响:建模期间,模型组大鼠精神萎靡,被毛凌乱,采食量和饮水量减少,出现腹泻甚至便血;试验组大鼠经过药物治疗后,采食和饮水量得到恢复,腹泻情况得到改善。与空白对照组相比,模型组大鼠DAI评分极显著升高（p＜0.01）;与模型组相比,阳性对照组、穿王消炎粉高剂量组大鼠的DAI评分极显著下降（p＜0.01）;穿王消炎粉低、中剂量组大鼠DAI评分呈下降趋势,但差异不显著（p＞0.05）。结果表明,穿王消炎粉能改善结肠炎大鼠的精神状态,降低DAI评分2.对大鼠体重和结肠组织病理变化的影响:建模第1 d时,各组大鼠体重差异不显著（p＞0.05）;建模第7 d时,与空白对照组相比,阳性对照组、穿王消炎粉低、中剂量组大鼠体重显著下降（p＜0.05）;治疗7 d后,与空白对照组相比,模型组大鼠体重下降明显（p＜0.05）,治疗组各组大鼠体重和空白对照组比较差异不显著（p＞0.05）,保持正常水平。通过HE染色和扫描电镜对大鼠结肠组织进行病理学观察,模型组大鼠结肠黏膜结构损伤严重,黏膜表面有大量的胞质碎片,经过药物治疗后,阳性对照组和穿王消炎粉低、中、高剂量组大鼠结肠组织形态和黏膜完整性得到恢复,溃疡病变减少,炎性细胞浸润减少。结果表明穿王消炎粉能改善结肠炎大鼠肠道损伤情况。3.穿王消炎粉对炎症因子的影响:ELISA结果表明,与空白对照组相比,模型组的IL-6、IL-1β和TNF-α的含量极显著升高（p＜0.01）,而IL-10的含量极显著降低（p＜0.01）;与模型组相比,阳性对照组和穿王消炎粉高剂量组IL-1β和TNF-α的含量极显著降低（p＜0.01）,IL-10的含量极显著升高（p＜0.01）;与模型组相比,穿王消炎粉低、中剂量组的IL-1β含量显著降低（p＜0.05）,TNF-α的含量呈下降趋势,但差异不显著（p＞0.05）;与模型组相比,穿王消炎粉低、中、高剂量组IL-6的含量均极显著降低（p＜0.01）,阳4.性对照组IL-6的含量呈下降趋势,但差异不显著（p＞0.05）。运用RT-q PCR技术对大鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达水平进行检测,与空白对照组相比,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达水平极显著升高（p＜0.01）;与模型组相比,阳性对照组的IL-1β、TNF-α的表达水平极显著下降（p＜0.01）,IL-6的表达水平呈下降趋势,但差异不显著（p＞0.05）;与模型组相比,穿王消炎粉低、中、高剂量组IL-1β表达水平均极显著降低（p＜0.01）,穿王消炎粉中、高剂量组的IL-6、TNF-α的表达水平极显著降低（p＜0.01）,穿王消炎粉低剂量组的IL-6、TNF-α的表达水平显著下降（p＜0.05）。试验结果表明穿王消炎粉抗炎作用明显。5.穿王消炎粉对大鼠脏器指数和结肠长度的影响:与空白对照组相比,其它各组大鼠的心脏、肝脏、肾脏和胸腺指数差异不显著（p＞0.05）;与空白对照组相比,阳性对照组和穿王消炎粉高剂量组的脾脏指数显著升高（p＜0.05）,模型组大鼠的脾脏指数有升高趋势,但差异不显著（p＞0.05）。与空白对照组相比,模型组大鼠的结肠长度显著降低（p＜0.05）;与模型组相比,穿王消炎粉高剂量组结肠长度显著升高（p＜0.05）,阳性对照组、穿王消炎粉低、中剂量组有升高趋势,但差异不显著（p＞0.05）。6.穿王消炎粉对大鼠抗氧化功能的影响:与空白对照组相比,模型组MDA含量极显著升高（p＜0.01）,SOD、GSH-Px活性极显著降低（p＜0.01）;与模型组比较,阳性对照组MDA含量极显著降低（p＜0.01）,SOD、GSH-Px活性极显著升高（p＜0.01）;与模型组比较,穿王消炎粉组低、中、高剂量组MDA含量极显著降低（p＜0.01）,穿王消炎粉中剂量组GSH-Px活性显著升高（p＜0.05）,SOD活性极显著升高（p＜0.01）,穿王消炎粉高剂量组GSH-Px的活性极显著升高（p＜0.01）,SOD活性有升高趋势,但差异不显著（p＞0.05）;与阳性对照组相比,穿王消炎粉低、中、高剂量组的MDA含量呈升高趋势,但差异不显著（p＞0.05）,穿王消炎粉低剂量组SOD、GSH-Px活性显著降低（p＜0.05）,穿王消炎粉中、高剂量组SOD、GSH-Px活性有降低趋势,但差异不显著（p＞0.05）。结果表明穿王消炎粉能缓解DSS导致的结肠氧化应激。7.穿王消炎粉对大鼠结肠菌群的影响:通过对大鼠结肠内容物进行16S r DNA高通量测序研究发现,与空白对照组相比,模型组结肠菌群多样性和丰富度极显著降低（p＜0.01）,与模型组相比,阳性对照组结肠菌群多样性和丰富度极显著升高（p＜0.01）,穿王消炎粉低、中剂量组的结肠菌群多样性和丰富度极显著升高（p＜0.01）,穿王消炎粉高剂量组结肠菌群的多样性和丰富度显著升高（p＜0.05）。分析结肠微生物群落结构得知,空白对照组、模型组、阳性对照组、穿王消炎粉低、中、高剂量组中的乳杆菌属所占微生物群落的比例分别为28.72%、13.39%、18.17%、24.02%、16.80%、12.64%。结果表明穿王消炎粉能恢复结肠炎大鼠肠道群菌的多样性和丰富度,同时穿王消炎粉还能恢复有益菌的数量。结论:1.穿王消炎粉能恢复结肠炎大鼠的体重、采食量和饮水量,降低DAI评分,减弱DSS引起的结肠组织病理损伤,具有治疗DSS诱导的大鼠结肠炎的作用。2.穿王消炎粉能够降低结肠组织中的MDA含量,提高SOD、GSH-Px的活性,恢复机体抗氧化能力。3.穿王消炎粉能够抑制大鼠促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的基因表达水平,提高抑炎因子IL-10的基因表达水平,还能改善结肠菌群丰富度和多样性,恢复有益菌的数量。