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目的： 本课题拟通过体外分离、培养人羊膜间充质干细胞,研究其对翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用,并初步研究其能否在体外诱导分化为眼表细胞,为用于翼状胬肉的眼表修复提供实验依据。 方法: 1、使用两步酶消化法分离hAMSCs,胰酶-EDTA消化去除羊膜上皮细胞,胶原酶Ⅳ消化分离hAMSCs。流式细胞分析法鉴定hAMSCs表面抗原分子,分化培养基体外诱导分化为脂肪细胞和骨细胞鉴定其分化能力。 2、使用Transwell共培养体系将hAMSCs与hPFs共培养,免疫荧光化学法及Wester-Blot法检测hPFs中α-SMA的表达,同时行移行分析评估hAMSCs对hPFs移行的影响。 3、将hAMSCs与hBCFs在Transwell体系中共培养,通过检测hAMSCs细胞角蛋白19的表达水平评价其向眼表细胞分化的程度,通过检测hAMSCs的α-SMA表达水平评价其分化机制与间质上皮化过程的相关性。 结果： 1、本实验方法分离hAMSCs体外贴壁生长,呈现成纤维细胞样,在体外能传代生长,经传代培养的hAMSCs表达间质干细胞表面抗原分子CD44、CD73与CD90,不表达白细胞抗原CD45。经间充质干细胞成骨分化培养基诱导培养3～4周后,其分化所得的细胞行茜素红S染色为红色;经间充质干细胞成脂分化培养基诱导培养1～2周后,行油红O染色为亮红色。 2、行共培养后,免疫荧光细胞化学分析显示hPFs的α-SMA表达水平明显降低,相同的结果通过Western-Blot分析得到证实,移行分析显示在移行分析的24小时、48小时和72小时,共培养组中hPFs的移行速度明显慢于非共培养组。 3、与hBCFs共培养一周后,免疫荧光细胞化学法显示hAMSCs的α-SMA表达水平显著降低,并且部分hAMSCs的CK19表达阳性。 结论： 1、采用两步酶消化法能获得hAMSCs,所分离的细胞能在体外贴壁生长、稳定传代。 2、hAMSCs表面分子CD44、CD73、CD90表达阳性;不表达白细胞抗原CD45。 3、按本实验方法分离培养的hAMSCs在体外能分化为脂肪细胞和骨细胞。 4、hAMSCs能通过体外共培养抑制hPFs的α-SMA表达,其抑制作用可能与EMT相关。 5、hAMSCs能通过体外共培养抑制hPFs的移行。 6、通过体外共培养可诱导hAMSCs向人眼表细胞分化,其分化机制可能与间质上皮化过程相关。