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目的：构建分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因，为进一步探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因表达并分泌针对成骨肉瘤细胞的靶向性sFv-TNF-α融合蛋白以及抗成骨肉瘤单链抗体在成骨肉瘤治疗中的作用。方法：首先采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗成骨肉瘤sFv (single chain variable region fragments antibody)基因5’端，其3’与人的肿瘤坏死因子TNF-α(tumor necrosis factor α)基因连接构成分泌型单链双功能抗体sFv-TNF-α基因，将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLXSN，构建抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因逆转录病毒表达载体PLXSN-sFv-TNF-α。结果：构建完成的逆转录病毒表达载体PLXSN-sFv-TNF-α，首先用EcoRI和BamHI双酶切下930bp左 军四蔗压大学硕士沧丈 右的片段，符合SFV－TNF－＊片段大＊，PLXSN－SPV－T”NI‘－u进 一步EcoRI和Xhol及Xhol和Ba一分别双酶U鉴定，分别切下 470hp左右及460hp左右的片段，符合TNF－a及sFv片段大小。 结论：我们尝试构建分子量尽可能小、兔疫原性尽可能弱的分泌 型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因，采用PCR方法在抗成骨肉瘤 SFV的5’端加上引导序列、3’端连上人的肿瘤坏死因于1”NF－。基－因，构建成功了分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基囚，汁将该 基因克隆至逆转录病毒表达载体I，LXSN，构建仇成骨肉瘤中链双 功能抗体基因逆转录病毒表达载休PLXSN七卜。丁Nr忙。 本研究为进一步探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基囚 表达并分泌针对成骨肉瘤细胞的靶向性s＊。，－＊N＊－U融合蛋臼以及 抗成骨肉瘤单链抗体在成骨肉瘤治疗中的作用。探讨柒免疫。基 因治疗和靶向治疗为一体的一种新的治疗成骨肉瘤方法。