青蒿多糖药理作用的研究

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hu_20092009
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青蒿多糖(Polysaccharides from Artemisia annua L.)是菊科蒿属植物青蒿的主要活性成分之一。目前,国内外对青蒿多糖的研究相对较少,本论文分离提取出青蒿多糖,从体内试验和体外实验入手,研究青蒿多糖的药理作用,为青蒿多糖的临床应用及开发新用途提供理论依据。具体研究方法和结果如下:(1)采用木瓜蛋白酶-水提醇沉法提取并精制青蒿多糖,蒽酮硫酸法测定还原糖含量,进行红外光谱分析等多糖理化性质分析;(2)用环磷酰胺(CTX)建立小鼠免疫抑制模型,分别以4种不同剂量(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg)的青蒿多糖进行腹腔注射给药,检测白细胞数量和血清中溶菌酶的水平,计算胸腺、脾脏指数并观察其组织形态学变化。选用正常小鼠,分别以5种不同剂量(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、300mg/kg)的青蒿多糖进行腹腔注射给药,测定胸腺、脾脏指数,检测血清中IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ水平及溶菌酶的水平;(3)进行了青蒿多糖的急性毒性实验,改良寇氏法计算青蒿多糖的半数致死量(LDso);(4)用二甲苯诱导小鼠耳廓急性炎症,分别用3种不同剂量(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)的青蒿多糖腹腔注射给药,测定小鼠耳肿胀率和肿胀抑制率。(5)用猪圆环病毒2型(PCV2)体外诱导RAW264.7细胞和猪脾细胞,测定NO、ROS、GSH、GSSG和MDA的水平及T-SOD舌性,筛选建立氧化应激模型的最适PCV2浓度。用PCV2建立RAW264.7细胞和猪脾细胞氧化应激模型,用不同浓度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)的青蒿多糖处理,测定NO、ROS、GSH、GSSG和MDA的水平及T-SOD活性。结果表明:(1)青蒿多糖中还原糖含量为24.74%,不含淀粉与氨基酸,红外光谱分析显示青蒿多糖糖链结构为吡喃型并有乙酰基团存在。(2)4个浓度的青蒿多糖均能显著对抗CTX引起的脾脏萎缩和溶菌酶水平降低(P<0.05);增大脾小结和升高淋巴细胞数量,增加胸腺内的淋巴细胞数量。25mg/kg的青蒿多糖能显著提高正常小鼠的IL-6水平,50mg/kg的青蒿多糖能显著提高正常小鼠的IL-1β和IFN-γ水平,100mg/kg的青蒿多糖能显著提高正常小鼠的IL-2水平;25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg的青蒿多糖能显著提高正常小鼠的溶菌酶水平(P<0.05);(3)青蒿多糖的LD50值为301.51mg/kg;其95%可信限范围为270.80~332.21mg/kg。(4)50mg/kg、100mg/kg的青蒿多糖能显著降低二甲苯所致的小鼠耳肿胀率(P<0.05);与地塞米松相比,100mg/kg的青蒿多糖能显著提高小鼠耳肿胀抑制率(P<0.05)。(5)浓度为10-2的PCV2适合建立RAW264.7细胞氧化应激模型,浓度为10-1的PCV2适合建立猪脾细胞氧化应激模型。PCV2体外诱导RAW264.7细胞,各个浓度的青蒿多糖均能显著降低ROS的水平,50μg/mL和200μg/mL的青蒿多糖能显著降低GSSG含量,25μg/mL、50μg/mL、200μg/mL青蒿多糖能够显著下调MDA水平,200μg/mL青蒿多糖能显著上调T-SOD的活性(P<0.05)。50μg/mL、100μg/mL的青蒿多糖能显著降低PCV2体外感染的猪脾细胞分泌NO水平,各个浓度的青蒿多糖均能显著降低PCV2体外感染的猪脾细胞分泌ROS的水平,25μg/mL的青蒿多糖能显著上调GSH的水平,50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的青蒿多糖能显著下调GSSG的含量(P<0.05)。结论:青蒿多糖具有免疫调节、抗炎和抗氧化的作用。
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