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目的:前期研究表明,Bcl-2可以介导骨骼肌远隔后处理对心脏的保护作用(待发表)。本研究预观察Bcl-2对骨骼肌远隔后处理的心脏保护作用是否被线粒体通透性转换孔(Mitochondrial Permeability TransitionPore,mPTP)启闭调节,是否经线粒体ATP敏感的钾通道(MitochondrialATP-Sensitive K+Channels,mKATP)启闭调节及mPTP与mKATP的相对位置如何?方法:健康新西兰大白兔30只,随机分为5组(n=6),开胸结扎冠状动脉左室支45分钟,之后进行2小时再灌注制作缺血再灌注模型。同时行双侧髂外动脉固定部位短暂结扎5min制作骨骼肌短暂缺血模型。随机分组如下:缺血再灌注组(Con)、骨骼肌远隔后处理组(RemotePost-conditioning,RPostC)、骨骼肌远隔后处理组+HA14-1+CsA (RPostC+HA14-1+CsA)、骨骼肌远隔后处理组+5HD(RPostC+5HD)、骨骼肌远隔后处理组+HA14-1+CsA+5HD(RPostC+HA14-1+CsA+5HD)。其中,HA14-1(2mg/kg)是选择性Bcl-2抑制剂;CsA(5mg/kg)是直接mPTP开放抑制剂;5HD(5mg/kg),即5羟基奎酸盐,一种线粒体ATP敏感的钾通道阻断剂。然后以Evans蓝标记心肌缺血区范围,以TTC法检测心肌梗死范围,并分别于缺血前、后及再灌注1、2小时测定血浆磷酸肌酸激酶(CK)活性和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:1.血流动力学指标在冠状动脉缺血前,各组间HR和MAP差异无统计学意义(P>0.05)。在冠状动脉缺血期间,各组间HR均呈上升趋势、MAP均呈下降趋势,但是这种变化各组间无统计学差异(P>0.05)。2.心律失常观察2.1心律失常类型:在基础状态下,各组均未发生任何心律失常。在冠状动脉缺血后,出现多种形式心律失常,其中包括室性早搏、室早二联律、短阵室速,心室颤动(给予抗心律失常药物利多卡因后可终止),其中以室性早搏为主,各组早搏(室早二联律和短阵室速发生次数较少,故均以早搏个数统计)分别为:Con组:82.5±25.44个;RPostC组:177.5±201.73个;RPostC+HA14-1+CsA组:62.83±43.91个;RPostC+5HD组:161.67±150.26个;RPostC+HA14-1+CsA+5HD组:138.33±83.43个。但各组间心律失常的发生无统计学差异(P>0.05)。仅前期研究RPostC+HA14-1组于缺血期出现心室颤动1次,给予抗心律失常药物(利多卡因)后立即终止。2.2心律失常发生时间在冠状动脉缺血前,各组均未发生任何心律失常。冠状动脉缺血后,出现多种形式心律失常,但多发生于冠状动脉缺血后15min内,各组早搏分别为:Con组:67±25.05个;RPostC组:152.33±166.92个;RPostC+HA14-1+CsA组:50.33±32.14个;RPostC+5HD组:107.5±133.56个;RPostC+HA14-1+CsA+5HD组:110±68.32个。但各组间缺血15min内室性早搏的发生次数无统计学差异(P>0.05)。缺血15min后心律失常明显减少,各组早搏分别为:15±0.84个、23.4±42.79个、12±12.86个、52.67±85.4个、16.17±12.29个。且各组间缺血15min后心律失常的发生亦无统计学差异(P>0.05)。再灌注心律失常多发生于再灌注开始后10min之内,再灌注10min后心律失常明显减少或者消失。本次实验中,各组间再灌注心律失常的发生次数较少,且各组间相比均无统计学差异(P>0.05)。3.心肌缺血及梗死程度测定3.1心肌缺血程度的测定从本研究得出:Con组、RPostC组及RPostC+HA14-1组缺血面积分别为:41.04±6.44%、34.09±6.67%、40.77±2.39%,但其三组间缺血程度无统计学意义(P>0.05)。在此基础上,我们进一步研究得出,RPostC+HA14-1+CsA组缺血面积为36.79±3.71%;RPostC+5HD组缺血面积为35.52±4.08%;RPostC+HA14-1+CsA+5HD组缺血面积为:42.41±5.99%。且Con、 RPostC、 RPostC+HA14-1+CsA、 RPostC+5HD及RPostC+HA14-1+CsA+5HD各组间心肌缺血程度亦无显著性差异(P>0.05)。3.2心肌梗死程度的测定与Con组相比,RPostC组梗死面积明显减少(29.54%±5.38%vs66.18%±9.68%,P<0.05)。前期研究表明:与RPostC组相比,RPostC+HA14-1组梗死面积明显增加(68.75%±10.75%vs29.54%±5.38%,P<0.05)。与RPostC+HA14-1组相比,RPostC+HA14-1+CsA组梗死面积明显减少(57.44±5.71%vs68.75±10.75%,P<0.05)。与RPostC组相比, RPostC+5HD组心肌梗死面积明显增加(56.48±14.06%vs29.54±5.38%,P<0.05)。与RPostC+HA14-1+CsA组相比,RPostC+HA14-1+CsA+5HD组心肌梗死面积明显增加(65.6±14.06%vs57.44±5.71%,P<0.05)。4.血清肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)的变化前期研究表明:与Con组相比,RPostC组于再灌注60min末及再灌注120min末LDH有减少趋势,分别为:再灌注60min末:312.97±116.73U/Lvs421.93±168.32U/L;再灌注120min末:347.75±94.07U/Lvs440.57±149.54U/L。与RPostC组相比,RPostC+HA14-1组再灌注120min末LDH有上升趋势,分别为:498.47±62.22U/L vs347.75±94.07U/L,但这种变化无统计学差异,且Con、RPostC、RPostC+HA14-1三组间CK及LDH均无显著性差异(P>0.05)。从本研究看出:与RPostC+HA14-1组相比,RPostC+HA14-1+CsA组再灌注60min末LDH含量呈下降趋势,分别为:344.32±105.36U/L vs433.78±103.06U/L,但这种变化无统计学意义(P>0.05)。与RPostC组相比,RPostC+5HD组再灌注60min、再灌注120min末LDH含量呈上升趋势,分别为:322.77±94.35U/L vs312.97±116.73U/L、357.05±66.2U/L vs347.75±94.07U/L,但这种变化无统计学意义(P>0.05)。且Con组、RPostC组、RPostC+HA14-1+CsA组、RPostC+5HD组及RPostC+HA14-1+CsA+5HD组间相比,CK及LDH无显著性差异(P>0.05)。结论:1.Bcl-2可以介导骨骼肌远隔后处理的心脏保护作用。2.Bcl-2介导的骨骼肌远隔后处理的心脏保护作用经mKATP和mPTP启闭调节,Bcl-2可能位于mPTP上游。3.mKATP和mPTP可能处于同一反应链上。