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目的:探讨槲皮素对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,并进一步研究其作用机制,从而为槲皮素治疗宫颈癌提供理论依据。
方法:将对数生长期人宫颈癌SiHa细胞,分别加入0、20、40、80μmol/L槲皮素进行处理,分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。进行以下实验,细胞增殖抑制率的测定:采用MTT法检测各孔细胞吸光值(OpticalDensity),并计算细胞增殖抑制率。检测细胞迁移距离和迁移率:采用细胞划痕实验测定每组细胞的迁移距离比计算其迁移抑制率。检测侵袭细胞数和侵袭率:采用Transwell小室法测定每组细胞的侵袭细胞数并计算其侵袭抑制率。相关蛋白检测:采用Westernblot法检测β-catenin、CyclinD1,c-Myc的蛋白表达水平。相关mRNA检测:采用实时定量PCR检测β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达水平。
结果:MTT法结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞增殖抑制率依次升高(P<0.01)。划痕实验结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞迁移抑制率依次升高(P<0.01)。Transwell小室结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞侵袭抑制率依次升高(P<0.01)。Realtime-PCR实验显示与对照组相比80μmol/L槲皮素组SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达降低(P<0.01)。Westernblotting实验显示对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc蛋白表达降低,呈浓度依赖性(P<0.01)。
结论:本实验通过对细胞增殖能力的检测,应用MTT实验揭示槲皮素对宫颈癌SiHa细胞具有抑制增殖作用,且呈现出药物浓度依赖性。通过对细胞迁移距离的测定,应用细胞划痕实验得出槲皮素可以通过抑制Siha细胞迁移距离的结论,且其对SiHa细胞迁移距离的影响受药物浓度的影响。应用transwell小室实验得出槲皮素可以抑制SiHa细胞的侵袭,且其作用结果与槲皮素的药物浓度相关。应用Westernblotting实验和实时定量Realtime-PCR法得出槲皮素可使SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达及其蛋白表达降低。
槲皮素明显抑制SiHa细胞生长和增殖,并抑制SiHa细胞迁移、侵袭,在槲皮素抑制Siha细胞增殖、迁移和侵袭中其作用机制可能是通过靶向调控Wnt/β-catenin信号通路及其下游蛋白表达实现的。
方法:将对数生长期人宫颈癌SiHa细胞,分别加入0、20、40、80μmol/L槲皮素进行处理,分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。进行以下实验,细胞增殖抑制率的测定:采用MTT法检测各孔细胞吸光值(OpticalDensity),并计算细胞增殖抑制率。检测细胞迁移距离和迁移率:采用细胞划痕实验测定每组细胞的迁移距离比计算其迁移抑制率。检测侵袭细胞数和侵袭率:采用Transwell小室法测定每组细胞的侵袭细胞数并计算其侵袭抑制率。相关蛋白检测:采用Westernblot法检测β-catenin、CyclinD1,c-Myc的蛋白表达水平。相关mRNA检测:采用实时定量PCR检测β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达水平。
结果:MTT法结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞增殖抑制率依次升高(P<0.01)。划痕实验结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞迁移抑制率依次升高(P<0.01)。Transwell小室结果:对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞侵袭抑制率依次升高(P<0.01)。Realtime-PCR实验显示与对照组相比80μmol/L槲皮素组SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达降低(P<0.01)。Westernblotting实验显示对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc蛋白表达降低,呈浓度依赖性(P<0.01)。
结论:本实验通过对细胞增殖能力的检测,应用MTT实验揭示槲皮素对宫颈癌SiHa细胞具有抑制增殖作用,且呈现出药物浓度依赖性。通过对细胞迁移距离的测定,应用细胞划痕实验得出槲皮素可以通过抑制Siha细胞迁移距离的结论,且其对SiHa细胞迁移距离的影响受药物浓度的影响。应用transwell小室实验得出槲皮素可以抑制SiHa细胞的侵袭,且其作用结果与槲皮素的药物浓度相关。应用Westernblotting实验和实时定量Realtime-PCR法得出槲皮素可使SiHa细胞中β-catenin、CyclinD1,c-Myc的mRNA表达及其蛋白表达降低。
槲皮素明显抑制SiHa细胞生长和增殖,并抑制SiHa细胞迁移、侵袭,在槲皮素抑制Siha细胞增殖、迁移和侵袭中其作用机制可能是通过靶向调控Wnt/β-catenin信号通路及其下游蛋白表达实现的。