论文部分内容阅读
目的：检测HL-1112对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）的体外抗菌活性，观察药物作用前后HL-1112对幽门螺杆菌超微结构的影响及微孔蛋白基因表达水平的变化，为新药的开发和临床合理筛选抗Hp治疗提供实验依据。 方法：采用琼脂稀释法检测HL-1112对Hp国际标准测序株ATCC700392的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentrations，MIC)。用含不同浓度(2mg/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL)HL-1112的平板培养Hp，根据光镜观察不同时间点（第2、3、4、5、6天）Hp形态的改变，选择形态改变显著的HL-1112浓度组及时间，将实验分组为空白组（未经药物处理的Hp）、阿莫西林对照组（经0.64μg/mL阿莫西林作用的Hp）和测试组（经2mg/mL HL-1112作用的Hp），制备扫描和透射电镜样品，电镜观察Hp超微结构的改变。应用实时荧光定量PCR技术检测HL-1112作用前后，空白组（未经药物处理的Hp）和测试组（经2mg/mL HL-1112作用的Hp）Hp微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表达量的变化。 结果：1、苗药HL-1112对国际标准测序株Hp ATCC700392的MIC为4mg/mL。2、在光镜下，空白组Hp随着培养时间延长，由螺杆状或短杆状逐渐变为U形、环形，进而发生球变。测试组Hp，形态由断痕螺杆状变为长断痕螺杆状，长度为空白组细菌的2~3倍，并有部分细菌影子残留，同时有少量环形菌及球形菌形成，且药物浓度越大，形态改变程度越明显。3、在电镜下，测试组Hp球变过程受抑制，较空白组菌体增长，表面有凹陷、打孔，甚至崩解现象出现，胞质分布不均或浓缩成团块状，胞内中心区域类核区缺失，U型Hp一侧分泌一种高密度物质。阿莫西林组Hp较空白组菌体杆状菌居多，菌体粗细不一，多数细菌表面多处囊状突起，细胞壁、膜破损，胞质电子密度下降。4、荧光定量PCR结果采用2-△△CT法计算，Hp在苗药HL-1112作用后其微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表达量分别较空白组上调2.339倍和2.597倍。 结论： 1、苗药HL-1112对Hp国际标准测序菌株ATCC700392有明显的抑菌作用，MIC为4mg/mL。 2、苗药 HL-1112通过减弱 Hp的球变能力及 Hp结构性群体的形成，影响Hp抗逆生存的能力。 3、苗药HL-1112通过破坏Hp基本结构或者改变外膜通透性，从而可能引起细胞内外离子平衡失调，干扰能量代谢并影响遗传物质的合成与代谢而发挥抗菌作用。 4、苗药HL-1112使Hp微孔蛋白基因omp8和omp32表达上调，可能引起外膜通透性改变，增加胞内药物浓度，或者改变胞内外离子的重新分布，导致细菌破裂发挥抗菌作用。