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目的:检测HL-1112对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的体外抗菌活性,观察药物作用前后HL-1112对幽门螺杆菌超微结构的影响及微孔蛋白基因表达水平的变化,为新药的开发和临床合理筛选抗Hp治疗提供实验依据。 方法:采用琼脂稀释法检测HL-1112对Hp国际标准测序株ATCC700392的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentrations,MIC)。用含不同浓度(2mg/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL)HL-1112的平板培养Hp,根据光镜观察不同时间点(第2、3、4、5、6天)Hp形态的改变,选择形态改变显著的HL-1112浓度组及时间,将实验分组为空白组(未经药物处理的Hp)、阿莫西林对照组(经0.64μg/mL阿莫西林作用的Hp)和测试组(经2mg/mL HL-1112作用的Hp),制备扫描和透射电镜样品,电镜观察Hp超微结构的改变。应用实时荧光定量PCR技术检测HL-1112作用前后,空白组(未经药物处理的Hp)和测试组(经2mg/mL HL-1112作用的Hp)Hp微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表达量的变化。 结果:1、苗药HL-1112对国际标准测序株Hp ATCC700392的MIC为4mg/mL。2、在光镜下,空白组Hp随着培养时间延长,由螺杆状或短杆状逐渐变为U形、环形,进而发生球变。测试组Hp,形态由断痕螺杆状变为长断痕螺杆状,长度为空白组细菌的2~3倍,并有部分细菌影子残留,同时有少量环形菌及球形菌形成,且药物浓度越大,形态改变程度越明显。3、在电镜下,测试组Hp球变过程受抑制,较空白组菌体增长,表面有凹陷、打孔,甚至崩解现象出现,胞质分布不均或浓缩成团块状,胞内中心区域类核区缺失,U型Hp一侧分泌一种高密度物质。阿莫西林组Hp较空白组菌体杆状菌居多,菌体粗细不一,多数细菌表面多处囊状突起,细胞壁、膜破损,胞质电子密度下降。4、荧光定量PCR结果采用2-△△CT法计算,Hp在苗药HL-1112作用后其微孔蛋白基因omp8、omp32 mRNA表达量分别较空白组上调2.339倍和2.597倍。 结论: 1、苗药HL-1112对Hp国际标准测序菌株ATCC700392有明显的抑菌作用,MIC为4mg/mL。 2、苗药 HL-1112通过减弱 Hp的球变能力及 Hp结构性群体的形成,影响Hp抗逆生存的能力。 3、苗药HL-1112通过破坏Hp基本结构或者改变外膜通透性,从而可能引起细胞内外离子平衡失调,干扰能量代谢并影响遗传物质的合成与代谢而发挥抗菌作用。 4、苗药HL-1112使Hp微孔蛋白基因omp8和omp32表达上调,可能引起外膜通透性改变,增加胞内药物浓度,或者改变胞内外离子的重新分布,导致细菌破裂发挥抗菌作用。