【摘 要】
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直接克隆p53基因下游基因的困难在于p53基因的过度表达导致细胞生长停滞或程序性死亡,所以很难获得足够的能表达p53基因的转基因细胞作为克隆其下游基因的材料.该实验采用哺
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直接克隆p53基因下游基因的困难在于p53基因的过度表达导致细胞生长停滞或程序性死亡,所以很难获得足够的能表达p53基因的转基因细胞作为克隆其下游基因的材料.该实验采用哺乳动物基因诱导表达系统一Tet-on基因表达系统,以人脑胶质瘤细胞U251为材料,建立了转p53基因的U251-p53细胞系,从而得到足够的过度表达p53基因的细胞以克隆p53基因的下游基因.应用这个细胞系,选择一个p53基因表达时强烈表达,而p53基因不表达时几乎不表达的cDNA片段,命名为Pa-1,进行克隆测序,确定它是一个新基因的cDNA片段.再通过细胞和组织原位杂交,结果证明它是一个p53基因的下游基因的cDNA片段.该文还就p53基因下游基因存在的广泛性及Pa-1基因的可能意义进行了讨论;同时也对Tet-on基因表达系统在p53基因研究中的应用、两次PCR扩增直接进行mRNA差异显著技术的应用进行了讨论.这对进一步克隆p53基因的下游基因无疑具有很好的参考价值.
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