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巴豆应用已经有了千年的历史,在《神农本草经》中就已收载,巴豆作为一味泻药有着广泛的应用。近年来,发现巴豆具有多种药理活性。然而,巴豆的毒性一直是其临床运用最大的障碍。因此,研究巴豆的毒性物质基础,严格控制其质量,保证用药有效安全,具有很大的意义。目的：本文立足巴豆毒性物质基础,以动物毒性为向导筛选出巴豆的毒性部位,并在次基础上对筛选出的毒性部位进行植化分离,分离巴豆中的具体的毒性化学成分。以毒性化学成分为指标,建立毒性化学成分的HPLC含量测定和检查方法,并建立起毒性部位的HPLC指纹图谱,从而提高巴豆质量控制标准。方法：1.小鼠急性毒性实验的方式分别测定巴豆及巴豆油不同部位的LD50,筛选出巴豆的毒性部位。2.对筛选出的毒性部位进行植化分离,采用正相硅胶、反相硅胶、凝胶、制备液相等手段。薄层色谱跟踪。分离出的物质进行波谱分析鉴定其结构。3.以分离得到的6个佛波醇酯类物质为对照品,采用液相检测的方法,建立6个成分的含测方法,并进行方法学考察。4.分别考察不同的流动相条件、不同柱温、不同色谱柱、不同流速等条件建立毒性部位的HPLC指纹图谱,并选择最佳波长,以分离得到的佛波醇酯类物质为对照品,标定指纹图谱中峰。结果：1.筛选得到巴豆的毒性部位主要集中在巴豆油,而巴豆油的毒性又集中在巴豆油的甲醇提取部位；2.分离得到8个佛波醇酯类的化合物,经结构鉴定,分别是：4-Deoxy-4α-Phorbol-13-acetate(1号)12-0-Tiglylphorbol-13-acetate(2号)12-0-(2-Methyl) butyrylphorbol-13-acetate(3号)12-0-Tiglylphorbol-13-benzoyl(4号)4-Deoxy-4α-phorbol-12-tigliate-13-acetate(5号)12-0-Tiglylphorbol-13-isobutyrate(6号)12-0-(2-Methyl)butyrylphorbol-13-isobutyrate(7号)12-0-Tiglylphorbol-13-(2-Methyl)butyrate(8号)HPLC法测定巴豆油中6个佛波醇酯类物质的含量,其中1号、2号、4号、5号、6号、8号分别在0.07955-0.795、0.2205-2.205、0.07955-0.795、0.0565-0.565、0.2125-2.125、0.059-0.590mg·ml-1范围内线性关系良好(r=1),平均回收率分别为99.83%、98.56%、98.33%、99.52%、98.44%、98.67%。3.在毒性部位的HPLC指纹图谱中确定了33个共有峰,建立了毒性部位的共有模式,10批巴豆药材的毒性部位指纹图谱相似度都在0.85以上。结论：巴豆毒性物质基础为巴豆油中佛波醇酯类物质,巴豆油中含有几十种佛波醇酯类物质。本文建立起该类物质HPLC含量测定方法,该法简便易行,稳定可靠,首次提供了一个巴豆油醇酯类含测的方法。此外,巴豆油毒性部位的HPLC指纹图谱提示了巴豆油毒性部位的基本情况,该法的稳定性、重现性好,可用于巴豆的毒性控制。