大肠癌在我国约占消化道恶性肿瘤的第三位，其发病率在近年有上升的趋势。部分病人发现已属晚期，丧失手术机会，更多的病人则面临术后复发，肝脏转移等问题。晚期大肠癌的综合治疗是临床急待解决的问题。 CD／5-FC是目前研究较多的治疗策略之一。胞嘧啶脱氨酶(CD)存在于某些细菌和真菌中，不存在于哺乳动物的细胞中，CD酶能催化胞嘧啶转化为尿嘧啶的脱氨基反应，可将无毒性的5-FC转化为细胞毒性5-FU，有潜在的抗嘧啶代谢作用。本实验通过脂质体法转染逆转录病毒载体G1CEACDNa至结直肠癌SW480细胞，RT-PCR方法验证其表达情况。通过形态学观察及流式细胞仪检测，验证转染CD基因的SW480细胞在前药5—FC作用下是否有凋亡现象。观察体外旁观者效应，初步探讨旁观者效应机理。主要结果如下： 1．RT—PCR产物电泳显示在相当于1.5kb处有显影条带。 2．转染CD基因的SW480细胞生长曲线示群体倍增时间为34h。 3．CD~+SW480细胞经前药5—FC处理后72h有形态学改变，透射电镜下可见凋亡和坏死征象并存，处理72h、96h后FCM显示细胞群中凋亡细胞和坏死细胞比例分别为20.2％、30.7％和19.6％、21.1％。 4．CD／5-FC治疗策略有明显的旁观者效应，当混合细胞群中CD~+SW480细胞仅占10％时约60％细胞被杀死，当CD~+SW480细胞占30％时，约70％细胞被杀死。 5．转染了CD基因的SW480细胞用5-FC处理后的培养上清具有明显 第四军医大学硕士学位论文 的细胞毒性，且可以引起细胞周期变化，表现为处于q期的细胞比 例减少，处于GZ期和S期的细胞比例增加。 近年来研究发现胃泌素前体和甘胺酸胃泌素通过多种机制刺激结直肠癌细胞生长，其中包括凋亡相关过程的参与。多种胃泌素受体括抗剂对结肠癌细胞的生长有明显抑制作用已经得到证实。本实验对转染了CD基因的大肠癌L。V。细胞联合应用前药5－FC和胃泌素桔抗剂CI－988观察杀细胞效应。主要结果如下：1．体夕培养细胞应用 5一FC（IMin＊1．L－’）和 C工988（IX 10－ham＊1·L－’）， 观察到处理后3d CD阳性细胞生长抑制率达40％，6d抑制率达97％， 较单用任何一种治疗杀伤率都高。2．裸鼠接种＊”LoVo细胞（IX 10’cell in 0．ZmL PBS）14d随机分组 给予不同处理，实验组1 给予5－FC腹腔注射，实验组2给予 CI－988（omg／kg）灌胃，实验组 3给予 5－FC（500mg／kg）腹腔注射并 CI个88＊0m针kJ灌胃，对照组腹腔注射生理盐水并自来水灌胃。实 验组1JJ及对照组肿瘤重量hg）估计值分别为261．62土126．36、 281．94土136．22、244．21土111．91、266．15土140．75，组间肿瘤大 小无统计学差异（P＞0．OI）。处理均为每日1次，连续20d。处死裸 鼠分离出肿瘤组织分别称重，实验组1、2、3及对照组肿瘤重量（g） 值分别为0．69土0．11、1．22士0．22、0．42 to．12、2．26f0．23，与 对照组相比实验组1、2、3瘤重均明显减轻（HO．01）。实验组1、2、 3的抑瘤率分别为 69．4％、45．9％、81．5％。3．瘤组织病理HE染色切片见对照组肿瘤细胞生长活跃，并可见核分裂 相及瘤巨细胞，而单用5干C组肿瘤细胞减少，细胞有空泡变性；单 用C二一988组可见肿瘤细胞减少，散在炎症细胞；联合应用二者前述 征象更明显。透射电镜下可见瘤组织中有凋亡和坏死征象同时存在。 7 第四军医大学硕士学位论文 本实验证实，转染了CD基因的肠癌细胞在给予5－FC治疗时同时存在调亡和坏死两种方式。CD／5－FC系统有明显的旁观者效应。胃泌素桔抗剂对肠癌细胞生长有抑制作用，联合应用胃泌素桔抗剂和CD万平C有明显的协同作用。