载酶人造细胞的构建及其对肝癌细胞的作用

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hensun01
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
尽管细胞生物学的知识一直在更新进步,但人们对细胞的整体结构和功能仍未完全了解,即便是自然界中最简单的活细胞,其结构和功能也极为复杂,而人造细胞的出现为细胞结构和功能的探索指引了新的方向。在过去的几十年里,人造细胞的研究在细胞生物学、分子生物学、超分子化学和生物医学等领域取得了令人瞩目的成就。由于磷脂组装体与细胞结构的相似性,聚合物载体本身的机械稳定性、化学多功能性和可生物降解性,将磷脂组装体和聚合物载体作为人造细胞模型在仿生领域的研究已日益成为人们关注的焦点。然而目前人造细胞的构建方法在很多方面还不够完善,与真实的生物细胞相比,人造细胞还过于简单,无法对复杂的细胞结构和功能进行模拟。另外,目前也鲜有研究细胞器之间相互作用的报道,且生理环境下人造细胞的应用和人造细胞与生物细胞的相互作用也有待探索。因此,针对这些问题,本文通过不同的方式构建了人造细胞并开展了系统的研究。以细胞膜的基本组分1,2-二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)为原料,利用点面电极产生的非均匀电场同时制备磷脂微管和巨型磷脂囊泡(giant unilamellar vesicle,GUV)。利用COMSOL软件分析了产生这种现象的潜在原因,电场产生的临界力Fc和流体场的侧向流动引起的牵引力F起主要作用,当Fc小于F时,形成磷脂微管;当Fc大于F时,则形成GUV。另外还从理论模拟上研究了电极间距对生成GUV和磷脂微管比率(GT ratio)的影响,并用实验进行了验证,结果显示电极间距越大,生成磷脂囊泡的比率越大。结合微接触剥离技术和电形成方法,利用点面电极与聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)印章可制备出附着于基底的GUV阵列。GUV的尺寸与剥离步骤所用的PDMS印章特征尺寸相近,通过PDMS印章的尺寸可以控制GUV阵列的尺寸,20、50和85μm的印章制备出的GUV直径分别为27.87±2.22μm、64.06±3.08μm和82.25±5.76μm。不同种类的单元磷脂或三元混合磷脂都可以制备GUV阵列,其中DOPC GUV阵列效果最好,可作为细胞模型进行后续研究。GUV阵列可作为封装DNA等生物分子、研究物质的跨膜运输和模拟细胞代谢的良好平台。GUV内羧基荧光素CF的扩散程度受蜂毒素浓度的影响,当蜂毒素浓度分别为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μM时,CF的扩散系数(D)分别为0.37×10-11、0.36×10-11、0.54×10-11、1.10×10-11、1.74×10-11、2.31×10-11、3.62×10-11 m2/s。将辣根过氧化物酶(HRP)负载于GUV阵列中被用于模拟细胞代谢,底物H2O2和o-PD成功地扩散至GUV内部发生反应,产生了荧光物质2,3-二氨基吩嗪(2,3-DAP)。受真核细胞区室化结构启发,基于海藻酸盐构建了同时含有载酶脂质体(LCat)和真实细胞核(pNuc)的多室人造细胞,其中pNuc来源于RAW 264.7细胞,可合成mRNA,而LCat可模拟细胞器,能够将过氧化氢(H2O2)转化为氧气和水。与不存在H2O2或不含LCat的人造细胞相比,含有天然pNuc和合成LCat的人造细胞在H2O2存在下可产生更多的mRNA,说明局部酶反应产生的O2可促进mRNA的合成。这种含有天然和人工细胞器的新型人造细胞的设计为缺氧细胞模型的制备或无细胞的蛋白质合成提供了机会。利用微接触印刷(μCP)技术制备了P1粒子阵列,评价了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和HepG2肝癌细胞在图案化基底上的黏附和增殖行为。HUVEC细胞在P1粒子阵列上的黏附取决于P1附着于基底的稳定性,若P1附着于基底的稳定性较弱,则HUVEC会取代P1黏附在整个基底并发生增殖,若P1附着于基底的稳定性足够强,细胞在无粒子存在的区域黏附;而HepG2肝癌细胞在P1阵列上没有空间选择性,48 h内细胞在此图案化基底上均匀黏附和增殖且不会破坏粒子阵列。利用层层组装技术,用聚合物涂层把葡萄糖氧化酶负载的脂质体(LGOx)固定到SiO2粒子上,构建出复杂的多室人造细胞,同样应用μCP技术制备人造细胞阵列,溶液中和阵列上人造细胞的活性直接取决于制备过程中组装LGOx的用量。最后,将载酶人造细胞阵列与HepG2肝癌细胞共培养,由于在底物葡萄糖存在的情况下,局部产生的H2O2可杀死肝癌细胞,因此与在无酶阵列中黏附的细胞相比,载酶人造细胞阵列作用下的HepG2肝癌细胞表现出更高的细胞死亡率。该结果对复杂多室人造细胞的设计与构建提供了重要指导,在细胞治疗领域具有潜在的应用价值。
其他文献
液体环境中激光与物质相互作用机理研究是激光碎石术、水下激光加工、水下激光推进等激光应用领域的重要基础理论问题。本文采用理论、数值模拟和实验手段研究了水环境中激光
自行研制开发了基于PC机+PMAC运动控制卡的开放式三坐标CNC系统,对普通插床进行了数控化改造.该CNC系统采用模块化设计,具有实时加工控制、图形自动编程、列表曲线拟合编程、
改革开放以来,我国经济社会发生翻天覆地的变化,取得了举世瞩目的成就。同时也要看到我国面临的生态环境问题十分严重,生态系统严重退化。近年来,侵犯社会公共利益的事件或行为不断发生,特别是在生态环境领域。公民环境公益诉讼制度将会成为扭转我国生态环境恶化趋势的有效制度,让破坏生态资源环境的行为得到及时遏制和查处。新《民事诉讼法》虽然规定了环境公益诉讼制度,但是在制度构成和理论解说上仍然存在诸多分歧。环境公
1、分别在5组等氮等能的吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus)饲料中添加不同水平的胆汁酸[0(对照组)、50、150、450和1350 mg/kg],试验选用初始体重为(8.16±0.24)g的幼
随着市场经济的快速发展,我国各行业之间的竞争越演越激烈,尤其是建筑行业。不论是哪一个企业,如果想要提高自身的核心竞争力,就必须从多个方面着手,其中,表现最为显著的就是
企业的行政管理能力是企业发展的必要因素,在企业组织构成中有很重要的地位。我国进入社会主义新时期后,市场经济又出现了新的形势,需要企业管理者能够充分了解时代的特色,把
信息对于决策起到了至关重要的作用。近年来,对于决策的最新研究范式已经从起先的描述性范式逐渐向信息处理范式转化:通过理解决策相关信息是如何被抽样、提取、整合,来理解
众所周知,不动点理论渗透到数学的多个领域,并被广泛应用于各种问题的研究中,作为不动点理论的延伸和推广,映射对(或映射族)的公共不动点受到广泛重视,并成为十分活跃的领域,特别是
手性是自然界的本质属性之一,手性化合物的两种构型通常表现出不同的药理学和毒理学作用,因此,手性化合物的拆分对现代制药和化学工业具有重要的意义。色谱柱作为高效液相色谱的核心,其填料起到至关重要的作用。论文主要包括如下几个方面:(1)合成了纤维素三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)作为手性识别材料,并涂敷于硅胶表面,制备了六种手性固定相色谱柱,考察了其对16种手性样品的拆分能力。实验结果表明:这六种手性
目的探讨血清高同型半胱氨酸在心血管疾病的检测中的临床价值。方法53例心血管病患者和46例健康体检者的对照的血清,采用荧光偏振微粒子发光免疫分析法(FPIA)测定血清中HCY含