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目的:1.建立一种简单、快速的在线衍生高效液相色谱荧光法（HPLC—FLD）测定血清中的犬尿氨酸（KYN）。2.建立同时检测血清KYN和TRP的在线线衍生高效液相色谱荧光法。3.初步探讨测定血清KYN和TRP含量变化在类风湿性关节炎中的临床意义。方法:1.血清标本与等量5%（V/V）高氯酸溶液混合处理去除蛋白后离心取上清液20μl直接进样分析。用HpersilC8色谱柱（300mm×6.0mm i.d.,10μm）分离;流动相为0.25 mol/L醋酸锌及50 mmol/L醋酸溶液（含3%乙腈）,流速为1.5ml/min;荧光检测激发波长和发射波长分别为365nm和480nm。KYN经流动相中的醋酸锌在线荧光衍生后,用HPLC-FLD进行测定。KYN峰采用峰保留值比较法和叠加法定性分析,用外标法测峰面积进行定量分析。同时探讨了检测波长、流动相种类、流动相中有机相的比例等因素对分离度和灵敏度的影响,考察了其它5种物质对待测组分的可能干扰。2.在第一部分建立的方法的基础上,调整检测激发波长和发射波长,0-10 min荧光检测激发波长和发射波长分别为,365nm和480nm,10 min后激发波长和发射波长分别为254nm和404nm,实现KYN和TRP的同时测定,并对该方法进行方法学评价。3.测定类风湿性关节炎（RA）患者（n=110例）血清KYN和TRP、初步探讨其含量变化在鉴别诊断、治疗监测、机制研究等方面的临床意义。分析血清KYN、TRP以及KYN/TRP比值与疾病活动性分组、关节X线分期、关节功能分级、类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、血沉的相关性。结果:1.血清标本内的KYN保留时间分别为8.1分钟。KYN线性范围为0.098～19.6μmol/L,最低检测浓度为0.04μmol/L;回收率为90.8-96.2%,日内CV为3.82%,日间为4.63%。苯丙氨酸（PHE）、酪氨酸（TYR）、犬尿喹啉酸（KYNA）、5-羟色胺（5-HT）和肌酐（Cr）在本文的色谱条件下对KYN的测定均无干扰。2.血清标本的KYN和TRP均分离良好,保留时间分别为8.1和11.5分钟。TRP的线性范围为4.9～196μmol/L。最低检测限为0.005μmol/L,回收率为92.6～106.9%,日内CV为3.63%,日间为4.44%。上述5种物质对待测组分KYN和TRP的测定均无干扰3.与正常对照组相比,RA组患者血清KYN含量显著升高、TRP含量显著降低;KYN/TRP比值与RF疾病活动度呈正相关。结论:1.本文建立了在线衍生HPLC-FLD法测定血清KYN,方法简单、快速、灵敏、特异、准确,适宜于临床与科研工作。2.在第一部分的基础上进行改进建立了在线衍生高效液相色谱—荧光检测法能同时测定KYN和TRP,且该方法的精密度,准确性,回收率,抗干扰能力,线性范围等指标均符合诊断实验的要求,具有进样量少、快速、灵敏度高、准确度较高、特异性好的特点。3.RA患者体内存在为严重的犬尿氨酸代谢紊乱,且KYN和KYN/TRP与RA疾病活动度相关,KYN/TRP是RA的疾病活动度指标。