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本研究以产琼胶酶的微球菌为实验菌株,通过克隆获得其全基因组序列,在Blast上比对序列、分析结构,氨基酸序列构建发育树,得知该酶属于GH16家族的β-琼胶酶。通过克隆表达含不同CBM结构域的重组酶,同时研究这些重组酶的酶学性质,以考察CBM结构域在GH16家族琼胶酶中的功能。主要研究结果如下:1、由Blast序列对比分析,得知该菌株的基因序列上有一个活性部位,两个CBM结构域,根据含有的CBM个数不同,对其进行不同长度的截断,重组酶Aga-ms-R是只含有一个CD,含有两个CBM结构域;重组酶Aga-ms-R1是含有一个CD,不含CBM结构域;Aga-ms-R2是含有一个CD,含一个CBM结构域。2、通过克隆表达,并对重组蛋白酶进行分离纯化及其酶学性质的研究。重组酶Aga-ms-R和Aga-ms-R2最适反应温度和pH分别为50℃和7.0,在pH 5.0～9.0范围内稳定性较好,70℃保温30 min,仍有部分酶活;重组酶Aga-ms-R1最适反应温度和pH分别为50℃和7.0,在pH 5.0～9.0范围内稳定性较好,70℃保温30 min,酶活降为0。三个重组酶经过分离纯化得到电泳纯,分别分子量约为:63.62 KDa,31.18 KDa,47.59 KDa,重组酶Aga-ms-R的比活力为:42.89 U/mg,动力学常数Km值、Vmax值分别为7.463 mg/mL,Vmax=2.804μmol/mL·min;重组酶Aga-ms-R1的比活力为:30.67 U/mg,动力学常数Km值、Vmax值分别为Km=8.943 mg/mL,Vmax=0.358 μmol/mL·min;重组酶Aga-ms-R2的比活力为:48.57 U/mg,动力学常数Km值、Vmax值分别为Km=1.571 mg/mL,Vmax=0.864 μmol/mL min;通过对其酶学性质的研究可知含有CBM结构域的两个重组酶比不含CBM的重组酶热稳定性好和酶活更高,表明CBM在维持热稳定性和高酶活力方面起着重要作用,使得Aga-ms-R,Aga-ms-R2有着更好的工业运用前景。3、通过薄层层析,高效液相分析,质谱分析的方法对三个重组酶的酶解产物进行精确分析,产物只有DP4。三个重组酶底物的特异性很强,只有在琼胶为底物下才能反应显色,褐藻胶,卡拉胶为底物的反应均没有显色。表明CBM的缺失并没有引起酶解产物的不同以及CBM对底物有着较强的专一性。本研究通过对GH16家族琼胶酶不同的结构域组合体进行相关酶学性质研究,分析酶解产物以及对比三个组合体的酶学性质和产物的差异性,对CBM结构域的功能进行分析,为CBM的应用提供理论指导。