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目的比较不同的PCR方法检测石蜡包埋病理组织中结核菌DNA的敏感性和特异性,选择最佳方法用于病理表现不典型之结核病与结节病的鉴别诊断,并评价其临床应用价值。方法一、不同方法的比较及最优PCR路线的确立:1、标本选择:取已确诊并经治疗已痊愈的典型结核病和结节病患者的石蜡包埋病理组织共68例,其中伴有干酪样坏死性肉芽肿的结核病组织37例;结节病组织31例。2、用三种不同的PCR扩增方法分别进行结核菌DNA的扩增:(1)间接原位巢式PCR法:取确诊结核病和结节病的病理组织切片,以结核分支杆菌插入序列IS6110为靶序列设计两对引物(分别为内引物和外引物),以外引物进行第一轮原位核酸扩增后,再以内引物进行第二轮扩增,用地高辛标记DNA探针行原位杂交,辣根过氧化物酶检测系统检测结果,同时设立阳性和阴性对照。(2)液相巢式PCR法:用酚-氯仿方法提取上述标本中DNA,并以此为模板,用上述两对引物,于Eppendorf管中进行两轮核酸扩增如上,凝胶电泳检测扩增结果,同时设立阳性和阴性对照。(3)液相普通PCR法:用上述所提DNA作模板,以上述两对引物中的内引物作为引物,进行一轮核酸扩增,并用凝胶电泳检测扩增结果,设立阳性和阴性对照。3、比较不同PCR方法的灵敏度和特异度,结合临床实际考虑,确立最优化PCR技术路线。二、将已经建立的、较其他方法更具优势的间接原位巢式PCR方法用于病理表现不典型之结核病与结节病组织标本的检测:1.标本选择:取经治疗后确诊,但病理表现不典型的结核病和结节病患者石蜡包埋病理组织各30例,并设立阳性和阴性对照。2、用间接原位巢式PCR方法进行结核菌DNA的扩增,检测扩增结果。3.用SPSS软件,行χ2检验对实验结果进行统计学处理和分析。结果1、各种方法的优劣比较:(1)用三种方法检测两组标本,均可观察到两组阳性率之间有显著差异。(2)间接原位巢式PCR法与液相巢式PCR法的灵敏度与特异度相仿,但间接原位巢式PCR法具有直观性、细胞定位等功能。(3)液