多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是一种育龄期妇女常见的内分泌和代谢紊乱性疾病，其发病率为5～2％，以高雄激素及长期无排卵为主要特征，常出现卵巢增大伴多囊性改变。PCOS除引起育龄妇女不孕外还对妇女的远期健康造成威胁，研究表明PCOS病人伴发子宫内膜癌、糖尿病、以及心血管疾病的危险远大于正常人群。近年来对PCOS的研究已经成为妇科内分泌领域的热点问题之一，但因其复杂的临床生化特征和多元化的致病因素，人们至今对于其病因尚无明确定论。观察表明PCOS存在家族聚集现象，提示遗传因素在PCOS中起到重要作用。 微粒体环氧化物水解酶(Microsomal epoixde hydrolase，EPHX)基因表达于多种组织和器官，其编码的蛋白酶是一种生物转化酶，它可以催化具有反应活性的环氧化物中间产物使其形成较低活性极更易水溶性的反式二氢二醇衍生物。因此EPHX在生物解毒、内源性甾体激素和外源性化合物的代谢、氧化应激中起重要作用。有研究认为EPHX基因突变可改变该酶的活性，并有报道低活性的EPHX基因单倍体与芬兰人群PCOS发病相关。本文讨论中国妇女EPHX基因多态性与PCOS发病易感性的关系。 PCOS是引起妇女不孕的重要原因，占无排卵性不孕的75％。辅助生育技术(Assisted reproductive techniques,ART)的开展为解决PCOS病人的不孕做出了巨大贡献。但是PCOS病人经促排卵治疗后，虽有卵泡发育和排卵，但着床率只有30-40％，体外受精胚胎移植的妊娠率长期滞留在20-30％，妊娠结局不尽如人意。近年研究结果提示，PCOS病人子宫内膜发育异常及胚胎容受性障碍可能是导致患者低妊娠率及不良的妊娠结局的一个重要原因。 乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)为一种内-β-葡萄糖苷酸酶，广泛分布于正常和迁徙的组织中，包括胎盘、血小板、单核细胞、淋巴细胞中性细胞中。其主要作用为降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan sulfate protoglycan，HSPG)上的硫酸乙酰肝素HS侧链，破坏基底膜，释放生物活性因子，从而参与组织侵袭和重塑、血管形成以及细胞迁徙。国外部分学者提出乙酰肝素酶促进胚胎种植，本研究是基于前面研究结果(北医妇产科基因芯片研究结果发现，PCOS窗口期子宫内膜Heparanase基因下调4.5倍)。探索乙酰肝素酶蛋白在正常和PCOS病人窗口期子宫内膜上的表达中，及其在正常和异常妊娠中的表达，揭示其在自宫内膜容受性中的作用。本课题分两部分对PCOS的遗传病因和子宫内膜容受性做一些探讨。 目的： 1.研究微粒体环氧化物水解酶(EPHX)基因多态性与中国妇女多囊卵巢综合征(PCOS)发病易感性的关联性，寻找PCOS的可能遗传病因。 2.研究乙酰肝素酶蛋白在PCOS病人窗口期子宫内膜上表达水平的变化，及其在不同患者早期妊娠绒毛和蜕膜中的表达，探讨其在子宫内膜容受性中的可能作用。 方法： 1.收集2006年11月至2007年1月在北大三院妇产科生殖中心就诊的门诊病人共204例，其中多囊卵巢综合征病人(PCOS)115例，对照组89例。取患者外周静脉血5ml，以标准酚-氯仿法抽取基因组DNA。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法来检测外显子3(Exon3)上T→C的变异和外显子4(Exon4)上G→C的变异，电泳成像，统计分析。 2.收集在2007年9月至2008年1月在北大三院生殖中心就诊的病人26例，其中PCOS病人窗口期内膜4例；对照组22例，对照组中12例为窗口期(排卵后6天)，10例为增殖期(月经第7-10天)。取正常早期妊娠(70天内)天内行人工流产病人绒毛10例，早期妊娠自然流产病人绒毛10例。所有标本分两部分，一部分石蜡包埋用于免疫组化检测；另一部分提取蛋白，用于Western-blot分析。所有结果用SPSS 1 0.0统计软件包分析。 结果： 1.PCOS组和对照组基因型分布未见明显异常。两组外显子3和外显子4的基因型分布无统计学差异，P=0.185（Exon3)和P=0.205(Exon4)；单点等位基因的分布也未见显著差别P=0.135(Exon3)和P=0.135(Exon4)。然而在对比预测的高、中、低和极低酶活性水平与PCOS发病相对危险时发现，高活性酶在PCOS组分布相对其他活性基因型较低，优势比分别为OR=0.774(CI=0.199-3.009)。 2.免疫组化结果显示：10例增殖期子宫内膜中大多数为Hpa表达阴性；部分增殖中晚期表达弱阳性；窗口期子宫内膜12例均表达阳性(阳性率100％)。两组利用积分光密度值(IOD)进行比较，统计学差异有显著性(t=-3.674，P=0.002)：PCOS窗口期4例子宫内膜均有Hpa表达，但表达水平呈现下降趋势。利用积分光密度值(IOD)分析结果：PCOS组和对照组差异无统计学意义(t=0.648，P=0.524)；正常早期妊娠人工流产绒毛中Hpa表达广泛，包括延绒毛分布的合体滋养细胞、绒毛间质，在细胞滋养细胞中表达弱，但在自然流产的绒毛中表达极弱。两者统计学分析差异有显著性(t=-2.164，P=0.000)。利用Western-blot方法来检测Hpa酶活性，在所有样本中以有活性的50KDa的蛋白片段为主要形式，有少部分也出现无活性的65KDa。 结论： 1.本课题研究中国妇女EPHX基因多态性对PCOS疾病发病的易感性，预测的高酶活性基因型在PCOS中的分布明显低于对照组，可以视为保护因素。 2.Hpa在正常妇女窗口期子宫内膜上的表达明显高于增殖期，因此Hpa可能对胚泡种植有促进作用；PCOS病人窗口期子宫内膜Hpa表达水平与正常窗口期子宫内膜无明显差异；正常早期妊娠绒毛中Hpa表达水平明显高于自然流产的绒毛。因此，本研究认为Hpa以其特殊的酶活性和血管活性粘附性促进了胚胎种植，可以作为评价子宫内膜容受性的分子标志。