硒化牡蛎多糖制备及其生物活性研究

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牡蛎是一种双壳类软体动物,含有丰富的微量元素和糖原,既可保肝护肝也可降血糖尿糖,具有良好的营养价值和药用价值。本文以实验室提供牡蛎多糖(CAG)为原料制备出硒化牡蛎多糖(SeCAG),并对SeCAG理化性质及生物活性进行探究,为SeCAG的研究提供基础数据。1.硝酸作为催化剂,亚硒酸钠和牡蛎多糖反应合成硒化牡蛎多糖(SeCAG),优化制备工艺得到最佳反应条件:m牡蛎多糖:m亚硒酸钠=1:1.2,硝酸体积分数为0.3%,反应温度70℃,反应时间10小时。利用HPLC法测定多糖中硒含量,此条件下多糖中硒含量为81.95mg/g,收率27.4%。2.利用纤维素DE-52分离纯化SeCAG。红外光谱结构表征显示SeCAG亚硒酸酯特征吸收峰出现在762cm-1处,推测硒化反应后牡蛎多糖中形成Se=O键,多糖被成功硒化。核磁共振13C-NMR图谱表明SCGP中C-3或C-2原子位发生了取代反应。3.体外抗氧化实验,SeCAG具有一定自由基清除效果和铁还原力。体外抗肿瘤实验,采用MTT法和流式细胞术检测SeOPS对肿瘤细胞活性细胞周期和凋亡的影响。与CAG相比SeCAG对两种肿瘤细胞(Hela、HepG2)活性具有一定抑制作用,当浓度达到200μɡ/ml时作用效果最为显著。流式细胞术检测结果显示SeCAG可促进Hela和HepG2细胞的凋亡,其中对Hela细胞效果较为显著。细胞周期结果显示SeCAG通过作用于两种肿瘤细胞有丝分裂的不同时期抑制肿瘤细胞生长。4.采用CCK-8法检测SeCAG对巨噬细胞活性的影响。随着SeCAG浓度的增加可有效提高巨噬细胞活性。当SeCAG浓度为200μɡ/ml时能显著促进巨噬细胞吞噬中性红和释放一氧化氮(NO)的能力。高浓度的SeCAG可刺激巨噬细胞免疫因子IL-1β,IL-10的产生。
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