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目的:本课题主要研究白介素10(interleukin-10,IL-10)对人成熟树突状细胞(mature dendritic cells,mDCs)骨架蛋白的影响及分子机制,为提高DCs的抗肿瘤疫苗的疗效提供理论依据。 方法:首先利用NCBI中的基因表达综合库(GEO)基因芯片GSE45466,使用R语言软件(RGui3.2.3)解析原始数据(.IDAT)并进行归一化数据处理,筛选差异基因(log|FC|≥2,P-value<0.05)进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and geno mes,KEGG)分析以及基因本体论(gene ontology,GO)分析,利用STRIN G online工具进一步筛选可信差异基因(可信度≥1),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图并筛选核心基因。完成生物信息学分析后进行试验验证,利用免疫磁珠筛选新鲜人外周血中的CD14+单核细胞,利用人重组粒细胞巨噬细胞刺激因子(hu-man recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating facto r,hrGM-CSF)、人重组白细胞介素4(hu-man recombinant interleukin-4,hrIL-4)、人重组肿瘤坏死因子α(hu-man recombinant tumor necrosis factorα,hrTN F-α)体外诱导为mDCs,用10ng/ml IL-10分别处理mDCs45min、2h、4h、8h、12h、24h;观察mDCs跨内皮迁移能的变化,并观察联合使用STAT3磷酸化抑制剂Stattic后,IL-10对mDCs跨内皮迁移能的影响。利用Western Blot验证IL-10下游信号通路,利用试剂盒检验RhoA/Rac1/Cdc42激活改变,激光共聚焦显微镜检测mDCs在IL-10处理4h后,细胞骨架F-actin、STAT3及pS TAT3的结构与分布情况。 结果:基因芯片结果显示IL-10处理mDCs45min差异基因8个,2h差异基因18个,处理4h差异基因26个,8h差异基因30个,12h差异基因19个(变化倍数≥2)。这些基因主要涉及细胞内细胞粘附、信号传递、免疫应答等。Transwell结果示10ng/ml IL-10共培养4h后,mDCs跨内皮迁移能力显著下降,Western blot结果示10ng/ml IL-10处理2h后,mDCs中pSTAT3明显上调,pSTAT1,pSTAT5没有明显改变;经由STAT3磷酸化抑制剂Stattic阻断后,mDCs的跨内皮迁移能力较未抑制组有明显改善,激光共聚焦显微镜下,10ng/ml IL-10处理后mDCs中的F-actin含量以有明显上升,这一现象在经Stattic阻断IL-10/STAT3通路后恢复,同时STAT3与pSTAT3的表达量改变与Western blot结果相一致,利用小r蛋白家族pull-down实验试剂盒检验Rho A,CDC42,Rac1的磷酸化水平。 结论:结合IL-10对mDCs基因表达的影响分析及实验验证,我们发现IL-10通过JAK/STAT3通路引起mDCs细胞骨架重组、跨内皮迁移能力及抗原呈成能力下降,早期阻断JAK/STAT3信号通路可以明显减少IL-10对mDCs的影响,这对进一步深入理解DCs的生物学特性和提高基于DCs抗肿瘤疫苗的肿瘤生物治疗效率来说有重要意义。