论文部分内容阅读
p16基因编码细胞周期蛋白依赖激酶的抑制因子，p16蛋白通过负调控CDK4/6的活性在细胞周期进行及细胞分化过程中发挥作用，因而p16基因的表达调控一直受到广泛的关注。很多证据表明，p16的表达受表观遗传修饰的调控并且与多种肿瘤的发生密切相关。尽管近来生化方面的研究表明表观遗传修饰，例如DNA甲基化和组蛋白修饰，参与了p16基因的表达调控，但是目前还没有关于组蛋白乙酰化修饰对p16基因表达调控机制的详细报道。在本文中，我们对组蛋白乙酰转移酶p300通过上调p16的表达而抑制HeLa细胞周期的进程及其可能的机制进行了深入的研究。我们的工作证实过量表达p300能抑制细胞周期的进行，而这一过程可通过small interfering RNA(siRNA)降低p16蛋白的水平而被逆转。在293T细胞中，p300参与p16的表达调控，而且p300和Spl对p16启动子水平，mRNA水平及蛋白水平的调控作用具有协同效果。针对Sp1和p300设计的siRNA能够通过部分地抑制Sp1和p300的表达而抑制p16启动子的活性。免疫共沉淀(CoIP)和哺乳动物双杂交实验表明，Sp1和p300通过Sp1的N末端和p300的Q区的相互作用而存在于同一复合物中。p16启动子截短突变和点突变报告基因荧光素酶活性分析表明在p300和Sp1调控p16启动子活性过程中p16启动子近端的Sp1结合位点起重要作用。染色质免疫沉淀(CHIP)实验证实，p300通过Sp1招募到p16启动子区域；p300固有的乙酰转移酶活性在p300参与p16的表达调控中是必需的；p300通过增强p16启动子区域的组蛋白H4的乙酰化水平促进p16基因的启动子活性。我们的研究工作将有助于更好的阐述p16基因转录调控的特异机制，并为基于p16的基因治疗提供重要的理论基础。