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目的：蛇葡萄素(AMP)是从粤蛇葡萄或显齿蛇葡萄中提取的小分子黄酮醇类化合物。近年来经过本课题组一系列抗肿瘤实验发现，蛇葡萄素在体外可显著抑制人早幼粒细胞白血病HL—60细胞、人红白血病K562细胞、人鼻咽癌HK-1细胞、人肝癌Bel—7402细胞、人乳腺癌MCF—7细胞的增殖。蛇葡萄素具有毒性低，来源广泛，提取率高的优点。但其稳定性较差，易发生氧化反应，给实际应用带来困难，将其制备成理想的剂型是解决这些问题的一个好办法。将蛇葡萄素和5-氟尿嘧啶两种抗肿瘤药物同时包封于脂质体给药系统制备成抗癌复方脂质体，解决蛇葡萄素难溶性和不稳定性的问题。
方法：⑴建立测定AMP—5-FU—LP中AMP和5-FU含量的方法；建立分离游离药物和复方脂质体来测定AMP—5-FU—LP中AMP和5-FU包封率的方法。⑵比较几种脂质体的制备方法，以包封率为指标，确定最优制备方法；在单因素考察的基础上，采用正交设计进行优化处方和制备工艺，确定AMP—5-FU—LP的最佳处方组成和制备工艺条件。⑶采用冷冻干燥技术将AMP—5-FU—LP制备成复方脂质体冻干粉，考察了各种冻干保护剂的保护效果和影响冻干效果的各工艺过程，确定了最佳冻干工艺和冻干保护剂处方。⑷对冻干前后AMP—5-FU—LP的理化性质进行了考察，包括粒径分布、包封率、Zeta电位、外观形态、pH值等，用透射电镜观察脂质体的形态，并考察了复方脂质体的体外释药性，以各项理化性质为指标，考察了复方脂质体在6个月内的初步稳定性。⑸用MTT法测定AMP—5-FU—LP对人白血病细胞K562增殖抑制的影响，计算抑制率和IC50，同时，观察是否存在时间和剂量依赖性。⑹用MTT法测定AMP—5-FU—LP对人肝癌细胞Bel—7402增殖抑制的影响，计算抑制率和IC50，同时，观察是否存在时间和剂量依赖性。
结果：①建立了紫外分光光度法同时测定AMP—5-FU—LP中AMP和5-FU含量的方法，回归方程分别为AAMP=0.04326c+0.00418，R2=0.9993；A5-FU=0.05005c+0.01739，R2=0.9997；经精密度和回收率实验考查，各项指标符合方法学测定要求；建立了葡聚糖凝胶柱层析法分离游离药物和复方脂质体来测定AMP—5-FU—LP的包封率的方法。②确定薄膜分散超声法为制备方法，以单因素考察结合正交设计优选出的最佳处方和制备工艺为：主药：卵磷脂=1:20，卵磷脂：胆固醇=5:1，磷脂浓度50mg/mL；维生素E的用量为5％，磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4，用量16mL，蛇葡萄素和5-氟尿嘧啶的用量各20mg。③确定AMP—5-FU—LP冻干粉的最优冻干工艺为预冻温度—70℃，预冻速度为快速降温，预冻时间为8h，冻干真空度<10Pa，干燥时间为28h。并确定了最佳冻干保护剂及处方为卵磷脂：甘露醇：蔗糖之比为1:1.5:1.5。所制得的冻干脂质体外观光滑、饱满、致密，加水后分散性良好。④透射电镜下脂质体的形态，为封闭的囊状或圆球状结构，均匀圆整，分散性好；冻干后脂质体的平均粒径为(153±55.4)nm，Zeta电位为(—42.8±13.4)mV，pH值为6.16±0.11，载药量为(5.88±0.59)％，AMP的包封率为(72.79±0.68)％，5-FU的包封率为(41.95±1.49)％。体外释药实验表明，药物包封于脂质体后具有缓释作用。初步稳定性实验表明，在4℃避光条件下放置6个月后，AMP—5-FU—LP冻干粉外观性状不发生变化，主药含量基本不变，各项指标无显著性变化，说明AMP—5-FU—LP制成冻干脂质体后稳定性增加，满足制剂长期贮存稳定性要求。⑤不同浓度的AMP—5-FU—LP对人白血病细胞K562有不同的增殖抑制作用，且呈明显的剂量和时间依赖性关系，AMP—5-FU—LP在体外浓度为2.5、5.0、10、15、20、25、30 ug/mL，处理时间为24h、48h、72h时，AMP—5-FU—LP的IC50分别是15.72ug/mL、12.82ug/mL和7.02ug/mL，72h时抑制作用最强，其抑制率大于相同浓度的AMP、5-FU、AMP—5-FU—Soln组(P<0.05)。⑥不同浓度的AMP—5-FU—LP对人肝癌细胞Bel—7402有不同的增殖抑制作用，且呈明显的剂量和时间依赖性关系，AMP—5-FU—LP在体外浓度为2.5、5.0、10、15、20、25、30 ug/mL，处理时间为24h、48h、72h时，AMP—5-FU—LP的IC50分别是18.29ug/mL、16.36ug/mL和10.64ug/mL，72h抑制作用最强，其抑制率大于相同浓度的AMP、5-FU、AMP—5-FU—Soln组。(P<0.05)。
结论：本实验成功将两种抗肿瘤药物AMP和5-FU同时包封于脂质体给药系统制备成抗癌复方脂质体，所采用的制备工艺简单可行，重现性好，包封率较高，药物溶解度和稳定性明显增加，冻干后有利于增加复方脂质体的长期稳定性，所制得的产品符合药典附录中有关脂质体指导原则的各项规定。体外释药实验表明，复方脂质体具有一定的缓释作用，延长药物的释放时间。体外抗肿瘤实验表明：复方脂质体对K562细胞和Bel—7402细胞有显著抑制其增殖的作用，AMP—5-FU—LP的抗肿瘤作用高于相同剂量的AMP组和5-FU组单独用药时的作用，发挥了两种药物的抗肿瘤协同作用，同时大于两种药物物理混合组的抑制率，说明把药物包封于脂质体后增强了药物的抗肿瘤协同作用，提高了药物的疗效。