论文部分内容阅读
在大量转基因植物被推向市场的同时，人们对转基因植物可能存在的风险感到担扰。在转基因作物中，不含标记基因和外源启动子将提高转基因作物的食用安全性和对环境的安全性，更易被广大消费者所接受，也有利于对同一个植物品种进行多次转基因操作。本研究在p13W8载体的基础上重新构建了含有反义蜡质基因，且去除了抗性标记基因(潮霉素基因)和35S启动子的安全性表达载体p13AWY-1，这可为日后利用基因工程的共转化法培育优质食味品质安全转基因水稻奠定基础，更有利于消费者食用安全和生态环境的可持续发展。
本研究还利用根癌农杆菌介导的共转化法，将含有pCAMBIA1301双元载体(含有潮霉素抗性基因、gus报告基因)和已成功构建的p13AWY-1双元载体(只含反义蜡质基因不含抗性标记基因和gus报告基因)的根癌农杆菌以1∶9的比例混合导入由粳型光敏核不育系水稻261S成熟胚诱导形成的愈伤组织中，经抗性筛选获得41棵转基因植株。转基因T0代植株经PCR检测，有10棵为共转化植株，共转化率为24.39﹪。Southernblot杂交分析证实，p13AWY-1双元载体T-DNA已整合进入转基因植株基因组中。利用pCAMBIA1301双元载体上的gus报告基因从T1代种子中淘汰具有报告基因及抗性标记基因的转基因后代，这为筛选只含目的基因、无抗性选择标记基因和报告基因的转基因后代奠定基础。
当今世界上正兴起一种新型稻米——软米育种。软米最大特点是：稻米的直链淀粉含量较低，一般小于10﹪，其米质介于粘性与糯性之间，口感极佳。目前已有报道表明，导入蜡质基因(Waxy)的反义片段能够有效降低稻米的直链淀粉含量，但其转基因后代中直链淀粉含量小于10﹪或明显降低的后代都比较少。因此，本研究又在安全性表达载体p13AWY-1的基础上构建含有双份反义蜡质基因的安全性表达载体p13AWY-2，即把双份反义蜡质基因片段构建在一个T-DNA区段上。该表达载体的成功构建可为培育直链淀粉含量明显降低的特种水稻奠定基础。