目的：膜性肾小球肾炎(membranous glomerulonephritis，MGN)，又称膜性肾病(membranous nephropathy，MN)，是引起成人肾病综合征最常见的原因。多数患者预后差。MGN的发病机制还不甚明了，目前的研究认为与免疫反应有关，而和免疫功能密切相关的是MHC基因。本研究拟对控制免疫应答的Ir基因(immune responsegene)I-Aβ1片断进行研究，探讨其与小鼠MGN发病机制的关系，以期论证Ir基因在肾炎发病中的重要地位和作用，揭示其分子病理学发病机制。 方法： 1．复制与鉴定小鼠膜性肾小球肾炎动物模型。按照Border[1]方法，制备阳离子化牛血清白蛋白(cationic bovineserum albumin，C-BSA)。选用近交系BLAB/c小鼠30只，20±2g，雌雄对半，随机分为实验组和对照组2组。实验组隔日尾静脉注射C-BSA0.2 ml，对照组小鼠隔日注射0.2 ml生理盐水(NS)，进行全程对照，于注射第3周起每周检测每只小鼠尿蛋白2次，四周末杀检，进行光镜、电镜、免疫荧光染色鉴定。 2．以逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerize chain reaction，RT-PCR)方法扩增并鉴定I-Aβ1基因。随机选取上述膜性肾病动物模型实验组和对照组小鼠，分别作为I-Aβ1基因序列的实验组和对照组。取小鼠脾脏组织提取总核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)，并鉴定RNA的纯度和完整性，用RT-PCR技术将总RNA逆转录成反向转录脱氧核糖核酸(complementary deoxyfibonucleic acid，cDNA)，并对I-Aβ1基因cDNA全序列进行体外扩增。 3．设计扩增产物内部特异性引物对PCR产物进行测序。 4．测序结果分析。将测序结果分别在BLAST上进行双重序列对比，以及Clustalx1.83多重序列对比。以杂合突变数、干扰峰数及突变位点进行统计分析。 结果： 1．以Border法制备阳离子化牛血清白蛋白，小鼠尾静脉注射制备动物模型稳定可靠。 2．用Trizol试剂提取总RNA，总RNA经紫外分光光度计检测，示A260/A280在1.77～1.93之间，提示RNA纯度较好；1％琼脂糖凝胶电泳可见28s、18s、5s三条带，28s和18s条带明亮、清晰，并且28s的亮度在18s条带的两倍以上，表明提取的总RNA完整性好。 3．逆转录PCR扩增实验组和对照组目的基因，扩增产物与脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)分子Marker相比较示：扩增产物大小在300～400 bp之间，与预期350 bp相符，阴性对照组(未加cDNA组)无产物。 4．送检实验组和对照组各10例PCR产物进行测序，结果送检20例均峰图明显，杂带较少，可获得清晰序列，实验组和对照组序列在BLAST上与正常序列对比，符合率分别为99.71％和99.94％；将序列文件中序列与DNA序列峰图对比，以峰图为准，校准每例标本的序列，用Clustalx1.83对实验组、对照组以及正常BLAB/c小鼠基因序列进行多重序列对比，结果实验组、对照组以及正常小鼠基因序列均一致。 5．杂合突变分析显示：实验组突变率为2.578‰，高于PCR扩增所致突变率(P<0.01)；对照组突变率为0.286‰，也高于PCR扩增所致突变率(P<0.01)。实验组和对照组比较，实验组突变率明显高于对照组(P=0.011<0.05)。 6.对实验组和对照组的干扰峰进行统计分析，实验组干扰峰的发生率为2.865‰，对照组为0.572‰，实验组比对照组更易出现干扰峰(P=0.021<0.05)。7.对实验组杂合位点进行分析。结果P=0.436>0.05，差异没有统计学意义，尚不能认为四个位点之间突变的发生率有差异。 结论： 1.小鼠MGN模型建立成功。 2.I-Aβ1基因在实验性膜性肾病小鼠中杂合突变率和干扰峰出现率均增高，可能和小鼠膜性肾病发生有关，为进一步的研究奠定了基础。