本文对腹泻与健康婴幼儿粪便中乳酸菌多样性差异进行了全面的分析,并对乳酸菌分离株的益生性能和抑菌能力进行了初步的研究,筛选出一株对常见食源性病原菌具有广谱抑菌性的菌株,在体外研究中探讨其对腹泻婴幼儿肠道菌群的影响。1.从医院收集了300个腹泻和85个健康婴幼儿粪便样品,分离出800株乳酸菌,随机挑选135株乳酸菌进行16S r RNA基因序列测序,结合形态学特征和生理生化特性,将其鉴定到种或亚种水平。结果发现在婴幼儿粪便中,肠球菌属所占比例最大,健康和腹泻分别为82.93%和84.04%,主要为屎肠球菌,粪肠球菌和鸟肠球菌;除此之外为乳杆菌属,分别占17.07%和15.96%,对于健康婴幼儿粪便来说,主要为干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、发酵乳杆菌以及植物乳杆菌,对于腹泻婴幼儿粪便来说,主要为干酪乳杆菌、发酵乳杆菌、副干酪乳杆菌以及鼠李糖乳杆菌。2.通过耐盐,耐酸碱,耐高低温胁迫生长实验,抗生素敏感性,疏水性与凝集性,模拟胃肠道存活实验,以及抑菌活性检测,从婴幼儿粪便中分离出的乳酸菌株中筛选出一株具有广谱抑菌活性的菌株——干酪乳杆菌ZX633(L.casei ZX633)。该菌株在试验条件5oC和10oC低温环境中能够生存,在3.0%和6.5%盐浓度中生长良好,在p H 3.5-p H 10酸碱环境中能够生长;对硫酸粘菌素,庆大霉素,青霉素,万古霉素,环丙沙星等抗生素显示出耐药性,对四环素,红霉素,氯霉素,利福平,氨苄青霉素等抗生素敏感;具有较高疏水性(10%),自凝集性为40%,与病原菌的共凝集率从5.14%到27.03%不等;其无细胞上清液对藤黄微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠道沙门氏菌、单增李斯特菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌等10株病原菌有不同程度的抑制作用,且过氧化氢酶处理对乳酸菌抑菌活性无影响,蛋白酶K处理后检测不到抑菌活性,将p H调为5.5时,仍对藤黄微球菌ATCC 4698和枯草芽孢杆菌ATCC 6633具有抑制作用。3.以浓度为10~5 CFU/g L.casei ZX633处理腹泻婴幼儿粪便,分析其对腹泻婴幼儿肠道微生物的影响。通过平板计数法和高效液相色谱法分别检测婴幼儿粪便中主要微生物活菌数以及主要短链脂肪酸含量,结果表明:与健康组和腹泻组相比,L.casei ZX633处理后酵母菌,大肠杆菌,乳酸菌和好氧细菌活菌数增加,趋于健康组;甲酸和丙酸含量都显著降低,与健康组无显著差异。通过Illumina高通量测序技术对16S r DNA基因的V3-V4区进行测序分析,Alpha多样性分析和聚类分析表明,健康组中微生物群落丰富度低于腹泻组,多样性高于腹泻组,在对腹泻样品进行处理后,微生物群落的丰富度和多样性降低。基因序列分类显示健康,腹泻与处理组都主要由放线菌门,变形菌门,厚壁菌门和拟杆菌门这四个菌门组成。在属水平上,腹泻组链球菌属和拟杆菌属丰度(分别为14.21%和10.05%)高于健康组(分别为3.26%和0.05%),大肠埃希氏菌-志贺氏菌属丰度(7.56%)低于健康组(27.63%),在L.casei ZX633处理后,这些菌属的丰度(分别为10.86%,7.29%和11.29%)向健康组发展。本研究表明,从健康婴幼儿粪便分离出的干酪乳杆菌ZX633对病原菌具有广谱抑菌作用,能够改善腹泻婴幼儿肠道微生物,可作为一株新的减少细菌性腹泻的天然益生菌。