血吸虫病(Schistosomiasis)是一种人兽共患病，它仍然是发展中国家亟待解决的主要的公共卫生问题之一；对疫区社会和经济的进步发展是一个威胁。化疗仍然是控制干预该病的重要措施，但它无法解决重复感染的难题，并可能引起药物抗性的产生。因此，有效的抗血吸虫病疫苗的应用，就成为控制该病流行的长期措施。但用常规基因工程技术获得的抗原的保护性效果都不甚理想，所以能否筛选到保护性效果更好的抗原成为血吸虫疫苗开发中的瓶颈。故从策略和技术上突破常规方法的限制，有望使血吸虫疫苗的研发取得更大的进展。本研究目的：①通过构建日本血吸虫部分cDNA表达质粒文库，在小鼠模型中评价该表达质粒文库导入机体后抗攻击感染的保护性效果，探索表达文库免疫策略应用于筛选血吸虫抗原分子的可行性，为保护性抗原基因的筛选提供一条快速有效的新途径。②测定日本血吸虫cDNA文库中一定数量的EST序列，应用生物信息学的工具，对其进行初步的模体、结构域等分析，为进一步进行大规模的日本血吸虫EST序列测定、分析预测可能的保护性抗原分子集合等奠定基础。研究方法：用PCR从原初日本血吸虫噬菌体文库中钓取部分目的片段后，构建成真核表达质粒文库，将其细分成子文库，经肌注途径直接免疫小鼠，再进行抗攻击感染的保护性效果试验，并对文库中少量的转化子进行插入片段的测序鉴定和分析。同时构建测序质粒文库，用Sanger氏方法，测定一定数量的日本血吸虫成虫EST序列，对所测序列用Blast、Genescan等程序进行序列构成、编码区等分析，通过提交序列至蛋白质预测服务器进行模体、结构域等分析。研究结果：构建成了约含10~5个转化子的真核表达质粒文库，部分转化子酶切及序列分析显示插入的序列具有血吸虫编码基因的特征；用总文库和3个子文库免疫后各组小鼠总IgG水平均低下；总文库和2个子文库免疫小鼠组攻击感染后获得了30％左右的减虫率。构建了约含10~4个转化子的测序质粒文库；对其中的32个克隆进行了EST测定，读出了26条序列，获得了有插入片段的日本血吸虫EST序列23条，Blast分析结果有6个单一克隆序列与数据库中已知的血吸虫基因相匹配、8个单一克隆序列与数据库中其他种属的基因片段或推断的基因相匹配、8个克隆代表6个rRNA蛋白基因、1条序列无数据库匹配；Genescan程序分析结果表明插入片段的G+C含量在40％左右，且大多具有编码序列的特征；从EST序列推断的蛋白质的预测分析显示，插入片段中大多包含与机体代谢、转录功能有关的模体和结构域。结论：①应用PCR从原初Sj噬菌体文库中钓取部分目的cDNA片段，所构建的含Sj部分cDNA真核表达质粒文库DNA直接免疫小鼠后，能诱导机体产生抗攻击感染的保护性；文库中既含有已证实的血吸虫抗原基因，也含有未知的血吸虫基因。表明应用cDNA表达文库免疫策略筛选血吸虫保护性抗原基因分子或表位集是可行的。②通过测定一定数量的日本血吸虫成虫EST序列及有关的生物信息学分析，发现文库中主要包含结构性的rRNA基因以及与机体代谢、转录功能有关的模体和结构域，也有与已知数据库无匹配的新基因。为进一步进行大规模的日本血吸虫EST序列测定、分析预测可能的保护性抗原分子集合等奠定了技术基础。