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前列腺癌(prostate cancer)是目前严重危害全球男性健康的恶性肿瘤之一,随着年龄增长,其发病率显著提高,而现阶段对于雄激素非依赖性前列腺癌缺乏有效的治疗手段。沙棘(Hippophae rhamnoides Linn)为胡颓子科酸刺属的灌木或小乔木,在我国作为药食两用作物具有广泛的用途。本文以沙棘果渣为原料,响应面优化沙棘果渣总黄酮提取工艺,并对沙棘果渣黄酮初提物进行纯化,通过MTT法筛选出具有体外抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖作用的纯化样品,并阐述其可能的作用机理。本文研究结果如下:(1)以总黄酮提取率为指标,通过响应面分析沙棘果渣总黄酮提取工艺,得到最终的优化条件:提取温度为60℃,料液比为1:16,乙醇体积分数为65%,提取时间60 min,此条件下总黄酮提取率达到111.75%±2.64%。(2)采用AB-8大孔树脂纯化沙棘果渣黄酮粗提物,通过比色法、高效液相色谱法测定各纯化样品总黄酮、槲皮素、异鼠李素、山奈素的含量,结果表明,AB-8大孔树脂可以有效富集沙棘果渣黄酮,其中S30样品总黄酮含量最高,达到47.04%,S50样品中总黄酮含量为25.41%;沙棘果渣黄酮主要以槲皮素、异鼠李素、山奈素黄酮糖苷组成,各纯化样品水解后这三种黄酮苷元含量显著升高,其中,水解样SH30中槲皮素、异鼠李素含量分别为2.98%、3.90%,SH50中槲皮素、异鼠李素、山奈素含量分别达到5.03%、19.54%、0.43%。(3)采用体外雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞模型,通过MTT法筛选对PC-3细胞具有增殖抑制作用的样品,结果表明,S10、S30、S50、SH30体外抑制PC-3细胞作用较差,不是理想的活性样品;SH50样品具有较强的体外抑制PC-3细胞增殖的作用,其作用PC-3细胞48 h和72 h的半抑制浓度值分别为43.09μg/mL 和 33.16 μg/mL。(4)通过比较槲皮素、异鼠李素、SH50样品对PC-3细胞的抑制作用发现,槲皮素、异鼠李素是SH50具有体外抑制PC-3细胞作用的主要因素。(5)细胞划痕和细胞形态实验发现,25μg/mL的SH50作用PC-3细胞24h后即可显著降低细胞的横向迁移能力,同时SH50作用PC-3细胞后可使细胞表现出明显的凋亡特征。(6)采用流式细胞技术、Western blot技术探究SH50对PC-3细胞细胞凋亡、细胞周期、相关蛋白表达水平的影响,结果表明,SH50可有效提高PC-3细胞凋亡率,具有较强的诱导细胞凋亡作用;并将细胞周期阻滞在G2/M期,影响DNA合成并延缓细胞周期的进行,从而抑制PC-3细胞增殖;同时SH50可通过上调Bax蛋白的表达量和下调Bcl-2蛋白的表达量来实现对PC-3细胞的增殖抑制作用。综上所述,从沙棘果渣黄酮粗提物中纯化得到的SH50样品具有较强的体外抑制PC-3细胞增殖的作用,推测其可能的作用机制为诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期在G2/M期以及调控Bax和Bcl-2蛋白的表达,这对于提高沙棘果渣的综合利用率及开发沙棘抗前列腺癌产品提供了一定的科学依据与理论指导。