2012-2013年河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及河南流行株的分离、鉴定

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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus, PRRSV)引起的以母猪流产、死胎、木乃伊胎等,断奶仔猪呼吸道症状等为特征的一种猪传染病。自1996年中国首次发现PRRSV,特别是2006年高致病性PRRSV出现以来,PRRS给我国养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV基因组易变异的特性会导致该病毒某些生物学特性改变,从而增加对该病的控制难度。本研究旨在通过对河南地区PRRSV分子流行病学调查、两株新变异毒株的重组分析以及流行毒株的分离鉴定,了解河南地区PRRSV流行情况,为河南地区PRRS的防控提供了参考依据。1.2012-2013年河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查收集54份疑似病料中17份检测为阳性,阳性率为31.5%;通过对阳性样品的ORF5全基因和NSP2部分基因序列进行遗传进化分析发现,河南地区流行毒株主要为美洲型PRRSV,且17份阳性样品中10份与高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)高度同源、2份与经典PRRSV高度同源、另外5份与美洲流行毒株NADC30高度同源,尤其是该类毒株的NSP2基因在不同部位存在393个核苷酸缺失,中国尚未见相关报道,是一类国内新出现的变异毒株。本研究结果表明,2012-2013年河南地区PRRSV主要流行毒株为HP-PRRSV,同时出现了新变异毒株,使河南地区乃至我国PRRSV变异种类更加多样化,提示加强PRRSV流行及变异的监测十分必要。2. PRRSV河南新变异毒株HENAN-XINX株与HENAN-HEB株全基因序列分析为进一步了解河南新变异毒株HENAN-XINX株与HENAN-HEB株遗传变异情况,根据Genbank上公布的与其亲缘关系较近的毒株的全基因序列设计引物,对2株河南新变异毒株进行全基因扩增与序列比对和遗传进化分析,并利用基因重组分析软件进行病毒的重组分析。结果显示,河南新变异毒株HENAN-XINX株、HENAN-HEB株与国内HP-PRRSV和经典毒株亲缘关系在整个基因组上相差比较远,而与国外流行毒株NADC30的亲缘关系最近,说明2株流行毒株为国内新出现的变异毒株。基因重组分析显示,新变异毒株HENAN-XINX很可能是国内流行毒株S1株和NADC30株的基因重组毒株,而新变异毒株HENAN-HEB很可能是国内流行毒株09JS株和NADC30株的基因重组毒株。由此表明,新变异毒株不仅在我国出现,还发生重组事件,该毒株有可能通过重组,迅速适应我国PRRSV的生存环境,应该给予高度关注。3. PRRSV河南流行株的分离与鉴定将检测的PRRSV阳性病料经常规处理后接种到Marc-145细胞株上,连续传代,并利用RT-PCR方法和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,结果在17份阳性样品中分离到3株PRRSV。本试验为研究PRRSV致病性,发病机理等提供可靠的实验材料,丰富了PRRSV流行病学数据库。
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