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肺癌是人类肿瘤致死的首要因素,其发病率逐年增多。尽管伴随着影像学检查技术如螺旋CT和磁共振的巨大发展,及在大规模人群中对肺癌广泛进行的痰细胞学和X胸片普查工作,但肺癌诊断后5年生存率仍很低。有证据表明早期诊断肺癌可以使I期肿瘤患者的5年生存率达到80%,因此肺癌早期诊断对提高患者生存率是至关重要的。传统的痰细胞形态学检查阳性率很低,对肺癌的早期诊断价值有限,寻求切实、可靠、有价值的肺癌早期诊断手段成为肿瘤学家所面临的主要研究课题。近年来,随着生物学研究技术的不断发展,特别是PCR技术的应用,使人们可以用越来越少的组织标本或脱落的细胞进行研究,如使用痰标本或支气管灌洗液标本进行肺癌相关基因标志或表型标志物检测,这为肺癌的早期诊断带来了希望。支气管肺癌的始发部位为支气管粘膜上皮,而癌变后自原位癌到晚期各个阶段,肿瘤表面的癌细胞都可脱落。脱落的癌细胞可随呼吸道的粘液分泌物,在纤毛运动作用下随痰液排出体外,因此加强对痰液中脱落上皮细胞的相关分子标志物检查应是肺癌诊断最简便可行的途径。异质核核糖蛋白(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP) 是一种RNA结合蛋白,它是由30多个蛋白质小分子构成的复合体,其中A、B组为基本核心成分。有研究表明hnRNP A2/B1与肺癌密切相关,但目前国内报道甚少。本研究从肺癌细胞中提取总RNA进行逆转录反应,经PCR扩增目的片段,将其克隆于pUCm-T载体上,并经酶切电泳、DNA测序鉴定分析;采用免疫组织化学染色和原位分子杂交方法,分别利用单克隆抗体和特异的cDNA探针,检测肺组织中hnRNP A2/B1的表达;采用免疫细胞化学染色方法,利用单克隆抗体检测临床可疑肺癌患者痰脱落细胞中hnRNP A2/B1的表达。从而阐明hnRNP A2/B1在肺癌诊断中的敏感性和特异性,为正确评价hnRNP A2/B1对肺癌诊断及早期诊断的价值提供实验依据。结果显示:1. 成功从肺腺癌A549细胞株中提取总RNA行RT-PCR;将经酶切电泳鉴定、DNA测序证实的目的片段制成hnRNP A2/B1 cDNA探针。2. hnRNP A2/B1免疫组化肺癌组染色阳性率为85.4%(35/41),明显高于非肺癌组30.8%(4/13),两组间有非常显著性差异(P<0.01)。其在胞浆、胞核均有表达,但主要在胞浆表达。 <WP=7>3. 四种类型肺癌组织均显示抗hnRNP A2/B1单抗阳性染色,其中鳞癌细胞染色阳性率为86.9%(20/23),较腺癌细胞78.6%(11/14)高,但两组间无显著性差异(P>0.05)。4. Ⅲ-Ⅳ期肺癌hnRNP A2/B1染色阳性率为88.9%(24/27),高于Ⅰ-Ⅱ期肺癌76.9%(10/13),但两组间差异不显著(P>0.05)。5. 有吸烟史组hnRNP A2/B1染色阳性率为80.0%(32/40)明显高于无吸烟史组50.0%(7/14),两组间差异显著(P<0.05)。6. 原位杂交显示hnRNP A2/B1基因表达的阳性率与免疫组化染色结果一致,但染色信号较免疫组化弱。7. 痰脱落细胞hnRNP A2/B1免疫细胞化学检查的敏感性为80.8%(21/26),特异性为78.9%(15/19),显著优于常规的细胞学检查;部分患者可于肺癌确诊前发现有hnRNP A2/B1过表达。综上所述,本研究得出以下结论:1. hnRNP A2/B1与肺癌组织类型、临床病理分期无关,但与吸烟密切相关。2. hnRNP A2/B1检查敏感性、特异性高,可用于肺癌的辅助诊断。3. hnRNP A2/B1是人肺癌形成早期事件中一种新的分子诊断标记物,可以用于高危人群的筛选。