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脊椎动物依靠免疫系统来抵抗、防御病原微生物的侵袭,其免疫反应被分为天然免疫和获得性免疫。天然免疫,又叫非特异性免疫,指生物个体出生时就具备的一种免疫防御功能。它在生物体内作用范围广,在免疫系统的防御机制中起着十分重要的作用,是抵抗外来病原微生物感染的重要防线。天然免疫系统中存在着大量模式识别受体(PRRs),这些PRRs能够识别各种病原体相关分子模式(PAMPs),通过不同的信号通路激活生物体的免疫反应。干扰素是免疫系统中的一种具有抗病毒功能的细胞因子。它在脊椎动物体内,对其天然免疫和获得性免疫均具有重要的作用。干扰素调节因子(IRF,interferon regulatory factor)是对干扰素基因表达具有转录调控作用的一种关键转录因子;IRF3和IRF7是IRF家族成员中,调节Ⅰ型干扰素基因表达的关键基因。宿主细胞内PRRs识别入侵的病原微生物后,通过一系列信号通路激活下游IKKε与TBK-1基因;被激活的IKKε与TBK-1共同作用,随后使IRF3与IRF7磷酸化。磷酸化的IRF3和IRF7进入细胞核内诱导IFN的分泌;从而诱发宿主天然免疫抗病毒反应。青鱼是中国“四大家鱼”之一,也是我国重要的淡水经济养殖鱼类。本实验室率先对青鱼的天然免疫系统展开研究;本论文首次克隆和表达了青鱼IRF3和IRF7基因,并对青鱼IRF3和IRF7进行了初步的功能研究。该论文的研究内容、实验结果如下所示:1.青鱼IRF3基因c DNA全长为1579 bp。其中,开放阅读框的长度为1344bp,5’非编码区长度为138 bp,3’非编码区的长度为97 bp,预测可编码448个氨基酸。2.青鱼IRF7基因的c DNA全长为1901bp。其中,开放阅读框的长度为1275bp,5’非编码区长度为78bp,3’非编码区的长度为538 bp,预测可编码425个氨基酸。3.青鱼IRF3的氨基酸序列与其他脊椎动物IRF3氨基酸序列同源性比对结果显示:IRF3在鲤科鱼类中保守性较高;青鱼IRF3与鲤科鱼类IRF3亲缘关系较近,与哺乳动物IRF3亲缘关系较远。4.青鱼IRF7的氨基酸序列与其他脊椎动物IRF7的氨基酸序列同源性比对结果显示:IRF7在鲤科鱼类中保守性较高;青鱼IRF7与鲤科鱼类IRF7亲缘关系较近,与哺乳动物IRF7亲缘关系较远。5.分别构建表达青鱼IRF3和IRF7的载体重组质粒。它们命名为pc DNA5-FRT/TO-HA-BC-IRF3与pc DNA5-FRT/TO-BC-IRF3-HA;pc DNA5-FRT/TO-Flag-BC-IRF7与pc DNA5-FRT/TO-BC-IRF7-Flag。使用磷酸钙转染法,将上述质粒转染进HEK293T细胞中,Western Blot检测到青鱼的IRF3和IRF7基因能够在HEK293T细胞中正常表达。青鱼IRF3的蛋白分子量大约为60 KDa左右;青鱼IRF7的蛋白分子量大约为60 KDa左右。6.双荧光素报告基因实验结果显示:青鱼IRF3能够上调斑马鱼IFN1基因启动子的转录活性,上调倍数在35倍至130倍之间。7.双荧光素报告基因实验显示:青鱼IRF7能够上调斑马鱼IFN3基因启动子的转录活性,上调倍数在12倍至27倍之间。综上所述,本论文克隆了青鱼IRF3和IRF7的c DNA全长序列,并对青鱼IRF3和IRF7的蛋白表达和功能做了初步研究。本论文为将来系统研究IRF3和IRF7在青鱼和其他鱼类的天然免疫中的功能打下了坚实的基础。