【摘 要】
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研究背景和目的:结直肠癌(CRC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,其发生率在全球癌症中排在第三位、死亡率高居第二位。钙通道的异常激活被证明在肿瘤的发生发展中起重要作用。然而,钙通道阻滞剂在CRC进展和免疫调节中的作用尚不明确,其临床意义有待挖掘。本项研究旨在探讨钙通道阻滞剂对CRC肿瘤微环境中肿瘤细胞与免疫细胞的作用及其分子机制,为钙通道阻滞剂的临床应用与CRC的治疗策略提供新的思路。研究方法:1、应
【基金项目】
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国家自然科学基金(Nos.81773082,81872423,81972813);
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研究背景和目的:结直肠癌(CRC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,其发生率在全球癌症中排在第三位、死亡率高居第二位。钙通道的异常激活被证明在肿瘤的发生发展中起重要作用。然而,钙通道阻滞剂在CRC进展和免疫调节中的作用尚不明确,其临床意义有待挖掘。本项研究旨在探讨钙通道阻滞剂对CRC肿瘤微环境中肿瘤细胞与免疫细胞的作用及其分子机制,为钙通道阻滞剂的临床应用与CRC的治疗策略提供新的思路。研究方法:1、应用GEO数据库相关数据分析并确定钙信号与CRC及其临床分期的相关性;2、通过荧光定量PCR检测不同类型钙通道编码基因在CRC细胞系以及正常肠上皮细胞系中的表达水平;3、通过体外功能试验筛选出抑制CRC进展的钙通道阻滞剂硝苯地平(Nifedipine,NIFE),应用数据分析及qRT-PCR从NIFE作用的靶标家族中筛选出NFAT2;4、通过免疫荧光实验(IF)检测NFAT2的亚细胞定位,应用过表达载体以及CRISPR/Cas9技术,并通过Transwell、CCK8、裸鼠皮下移植瘤和原位移植瘤发生模型,探讨NFAT2对CRC细胞在体内外增殖和转移能力的影响;5、通过IF检测NIFE及钙通道激动剂BAY-K-8644(S)-(-)(BAY)对NFAT2亚细胞定位的影响;6、通过免疫共沉淀(CO-IP)以及IF探讨NFAT2和CRC癌基因(LASP1)的关系,并通过WB实验明确其作用机制;7、通过染色质共沉淀(CH-IP)和荧光素酶报告基因实验筛选并验证NFAT2的潜在靶点;8、通过流式细胞术检测NIFE对CD8+T细胞PD-1表达影响,构建小鼠原位肿瘤发生模型,探讨NIFE协同PD-1抑制剂的抗肿瘤作用。研究结果:1、钙信号相关基因在CRC组织中高表达,并与CRC临床分期呈正相关;2、L型钙通道在CRC组织和细胞系中高表达;3、硝苯地平(NIFE)抑制CRC进展,而BAY的作用相反;4、NFAT2促进CRC细胞恶性表型并可被NIFE逆转;5、NIFE抑制钙内流以抑制NFAT2去磷酸化、激活和核易位;6、LASP1-AKT-GSK3β促进NFAT2核易位,并可被NIFE逆转;7、NFAT2招募STAT3促进下游靶点的转录活性;8、NIFE抑制CRC细胞PD-L1和CD8+T细胞PD-1表达。结论:本研究结果表明,钙通道阻滞剂(Nifedipine,NIFE)一方面可通过抑制NFAT2去磷酸化、激活、核易位以抑制CRC的恶性表型,另一方面可通过抑制CRC细胞PD-L1和CD8+T细胞PD-1表达并可重新恢复CD8+T细胞对肿瘤细胞的免疫监控,可激活或增强基于PD-1的抗肿瘤免疫治疗。本研究结果为NIFE影响CRC细胞及免疫应答的双重作用提供了直接证据,表明其作为单药或联合免疫治疗晚期CRC具有良好的前景,并为其在CRC患者尤其是伴有高血压患者中的应用提供了充分的科学依据。
其他文献
目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是由中脑黑质致密部及纹状体部位的多巴胺能神经元病变引起的一种神经退行性疾病。虽然PD的病因尚未完全清楚,但线粒体功能障碍及脑内氧化应激增强引起的多巴胺能神经元病变被认为是PD发生发展的主要因素之一。因此,改善线粒体功能障碍及阻断氧化应激诱导的多巴胺能神经元损伤的神经保护剂可能有助于延缓PD的进展。运动功能是由传递到纹状体的多巴胺能神经元
耳聋是全世界现阶段乃至将来都要面对的重大健康问题,而内耳畸形(IEM)是导致其产生的最重要的原因之一。据Sennaroglu 2017年提出的方法,耳蜗分隔不全(IP)和前庭导水管扩大(EVA)约占IEM中的80%以上。由于内耳解剖结构复杂以及缺乏高分辨CT设备和经验丰富的影像学诊断医生,很多病例存在误诊或漏诊。因此,寻找一种新的或互补的方法来提高IEM诊断水平是非常有意义的。近年来,科学家们发现
背景:胎儿生长受限(FGR)是导致患儿近期和远期神经发育障碍的主要原因之一。FGR脑发育近期损伤表现为脑内神经干细胞(NSC)增殖分化减少,细胞构成比、突触连接异常,脑代谢异常;远期为运动学习障碍,神经行为异常。胎儿NSC分化是脑发育基础,海马是学习认知关键部位。补充牛磺酸激活蛋白激酶A(PKA)-环磷酸腺苷反应结合蛋白(CREB)通路改善FGR胎脑发育,相关机制尚待深入研究;对远期海马神经细胞、
目的和意义鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种起源于鼻咽部的高发恶性肿瘤,其发病具有显著的地域及种族特异性,大多数鼻咽癌患者分布于东南亚地区,而中国是鼻咽癌发病率及死亡率最高的国家之一。目前鼻咽癌的复发和转移是鼻咽癌临床治疗所面临的最大挑战,也是影响鼻咽癌患者生存率的主要威胁。因此针对鼻咽癌远处转移具体分子机制的深入研究是改善鼻咽癌患者预后的关键。肿瘤转移是影响
背景和目的Wound induce hair Neogenesis(WIHN).是哺乳动物罕见的创伤后皮肤与毛囊再生模型。在小鼠或兔子背部大面积的全层皮肤创伤及伤口愈合后,瘢痕中央会再生出具有完整结构与毛发周期的毛囊,而非只有瘢痕组织。这些毛囊会诱导周围产生脂肪细胞,使得伤口中央的皮肤恢复正常皮肤的结构与功能。研究此毛囊再生模型可以给人类皮肤再生医学带来新的见解。伤口愈合中重要的参与者:皮肤微生物
背景皮肤作为人体最大的器官,具有重要的屏障保护功能。增殖期是皮肤创伤愈合的重要时期,该时期表皮的再上皮化过程对恢复受损皮肤的完整性起到关键作用。再上皮化中最重要的是角质形成细胞的迁移以完成创面覆盖,而细胞的迁移过程离不开细胞骨架的变化。Rho GTPase家族是调节细胞骨架的关键蛋白,其家族成员RhoA、Rac1和Cdc42,分别调控细胞肌动蛋白应力纤维、片状伪足及丝状伪足。microRNAs(m
胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PD AC)是一种患者预后极差的消化系统肿瘤,是胰腺恶性肿瘤最常见的病理类型,其治疗难度很大。诸多研究表明myeloma overexrepssed(MYEOV)是一种促癌基因,在多种人类肿瘤的发生发展中起着重要的作用。然而MYEOV在胰腺导管腺癌中的作用尚不清楚。本研究旨在阐明MYEOV在胰腺导管腺癌中的作用及其机制
背景:TGF-β具有免疫抑制效应,属于抗炎生长因子,能下调单核/巨噬细胞促炎细胞因子合成及MHC-Ⅱ的膜表达,或通过调节Th1、Th2、Th17、Th9、CD8+、CD4+T细胞活性而影响获得性免疫。经与其受体复合物结合,TGF-β触发细胞内信号并发挥调节功能。骨骼肌炎症及再生过程中,TGF-β参与启动肌卫星细胞有丝分裂,有助于卫星细胞的增殖、分化及肌管融合。同时,TGF-β能促进肌组织纤维化和细
目的:神经根型颈椎病在各型颈椎病中发病率约占60%-70%,颈椎牵引是其重要非手术治疗途径。本文基于神经根型颈椎病牵引康复理论指导,研制牵引锻炼颈托;通过临床试验研究牵引锻炼颈托对神经根型颈椎病受试者的作用,分析了牵引干预对受试者颈椎的影响;通过有限元分析技术,研究了牵引对神经根型颈椎病受试者颈椎的生物力学影响。本文通过牵引锻炼颈托的设计研制,及其临床试验研究和生物力学分析,明确其临床适应症疗效和
背景:生殖细胞是向下一代传递遗传和表观遗传信息的重要环节,生殖细胞的缺陷可导致不孕不育等疾病的发生。人类原始生殖细胞(human primordial germ cell,hPGC)特化是人类生殖和进化的基础,这一过程发生在囊胚着床后不久(约在孕2~3周),该时期胚胎组织获取困难,不利于体外研究的开展,hPGC的特化机制目前尚无报道。尽管人类原始生殖细胞样细胞(human primordial g