基于SPR和电化学的转基因检测DNA传感器研究

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随着转基因技术在遗传育种和农业领域的应用和快速发展,转基因产品的种类和数量逐渐增多,其安全性已成为社会舆论关注的热点问题。目前,转基因作物检测的经典方法和标准方法是核酸分析法,如定性PCR、实时荧光定量PCR和数字PCR。这些方法的优点是多数检测实验室都能满足仪器设备的条件。这些方法的缺点是需要通过扩增来放大信号,大多属于费时的终点法,而且反应后的成分不能重复使用。因此,转基因检测技术的创新与发展迫在眉睫。本研究选择胭脂碱合酶终止子(t-nos)转基因元件作为检测对象,成功地开发了一种无标记的多维(Multiple Dimensions,MD)DNA探针电化学(Electrochemical,EC)传感器策略。利用电化学传感技术,设计MD DNA探针(由中间的poly A序列和两端的两个侧翼捕获探针组成),并对整个体系的构建、MD DNA探针的组装条件、特异性、灵敏性、稳定性以及再生性进行研究。其中,中间的poly A片段在金电极表面表现出良好的组装能力,提高了生物传感器的重复性、稳定性和再生性。实验过程中比较了不同长度的poly A序列,当poly A片段的长度为30 nt时,获得最高的信噪比(S/N)。通过检测经过梯度稀释的目标DNA,检测限(LOD)最终达到了10 f M,工作范围从10 f M到1 n M。作为一种新型界面组装策略,MD DNA探针方法大大降低了探针设计的经济成本,并且通过修改探针序列可以方便地扩展功能。同时,利用表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)技术对电化学部分进行了表征验证。结果发现,与电化学部分实验结果基本一致,虽然检测限较之电化学方法略有不足,仅达到了1 p M,但是起到了实时监测的作用。通过这种联用验证方式,构建出了一种高特异性和高灵敏度的多维电化学-表面等离子共振(EC-SPR)检测方法,用于转基因样品分析,进而开发出一种既快速灵敏、无需标记、又可再生的新型生物传感方法,为新型转基因检测技术的研究提供了可靠的实验基础和技术依据。
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