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根癌病已严重影响到月季的观赏价值和生产应用。本论文研究了两种月季砧木荷花蔷薇(Rosa.multifloraf.carnea)(感病)和野蔷薇No.4(Rosa.multiflora‘inermisNo.4)(抗病)无菌条件下成株和实生幼苗的获得;活体、离体条件下,不同抗病鉴定方法对成株和幼苗的影响;以及成株和幼苗离体叶片经根癌农杆菌侵染后,苯丙氨酸解氨酶活性和乙酰丁香酮含量的变化。通过分析成株和幼苗检测结果的相关性,拟建立适合月季砧木苗期根癌病的鉴定方法。研究结果如下:
(1)影响两种砧木种子萌发最主要的因素是冷藏时间;野蔷薇No.4种子在冷藏10~15d、GA30.05~0.1mg/L处理时发芽率在90%~100%,荷花蔷薇种子在冷藏15d、GA30.15mg/L处理时达最高发芽率为73%。
(2)荷花蔷薇茎段最适芽萌培养基是MS(无硝酸铵)+6-BA1.0,萌芽率是95%;最适增殖培养基是MS(无硝酸铵)+6-BA0.9+NAA0.01,增殖系数为2.72;野蔷薇No.4在MS(无硝酸铵)+6-BA0.9+NAA0.01培养基上的增殖系数为2.33。荷花蔷薇和野蔷薇No.4在1/2MS+0.5IBA培养基上的生根率分别为100%和87.5%。
(3)荷花蔷薇和野蔷薇No.4的扦插苗和实生苗根部浸泡接菌并水培后发现,根系均无肿瘤发生,但二者根系均比对照生长旺盛,表现在须根数量明显增加。
(4)活体根颈处针刺接菌发现,荷花蔷薇扦插苗根颈处发病率为80%,肿瘤的平均直径在23mm左右;野蔷薇No.4扦插苗根颈处发病率为15%,肿瘤的平均直径在15mm左右。两者差异显著。但无论是荷花蔷薇还是野蔷薇No.4,实生苗都没有观察到肿瘤的发生。
(5)离体叶片菌液侵染后检测gus基因瞬时表达率。结果发现,成株期叶片的gus基因瞬时表达率都高于苗期,从一定程度上反应两种蔷薇材料苗期对根癌病的抗性强于成株期。而无论是成株期还是苗期,荷花蔷薇的gus基因瞬时表达率峰值都高于野蔷薇No.4,两个时期存在极显著的相关性,可以用苗期的gus基因表达率来反应成株期的表达率。
(6)离体叶片经根癌农杆菌侵染后,荷花蔷薇和野蔷薇No.4的幼苗和成株苯丙氨酸解氨酶活性变化呈现相同趋势,均出现两个高峰,分别在侵染后第1-2d和第4d,且野蔷薇No.4比荷花蔷薇峰值大。成株期和实生幼苗期的酶活存在正相关性,可以用苗期的酶活变化来反应成株的抗性。
(7)成株期和实生幼苗期离体叶片经菌液处理后,渗出物中乙酰丁香酮含量均为荷花蔷薇高于野蔷薇No.4,二者之间存在显著差异;成株期和实生幼苗期乙酰丁香酮含量存在正相关。