论文部分内容阅读
突触是神经细胞相互联系、流通信息的重要场所,在神经元之间的化学信号传递过程中,为了最大限度提高信号传导的敏感性,神经元受体以及其它参与信号传导的蛋白精确的集中在神经递质释放的周围。同时在突触发生过程中,突触处所形成的特殊蛋白膜,如突触后膜的PSD(postsynaptic density membrane)以及与之相关的细胞内膜蛋白具有组成突触结构、稳定信号传导、维持突触结构稳定的重要作用。Dystrophin Glycoprotein Complex即是这样一个蛋白复合物,其中dystrophin是一个大的胞浆骨架蛋白,最初因为Duchenne Muscular Dystrophy和Becker Muscular Dystrophy疾病从基因中分离克隆鉴定出来。此后生化和分子生物学研究显示:dystrophin是一个肌膜相关蛋白复合物DGC(dystrophin glycoprotein complex)中的一个重要组成分子。DGC以穿膜蛋白β-dystroglycan为核心,膜外通过α-dystroglycan与细胞外基质蛋白如lamininα2相连,膜内通过β-dystroglycan C端与dystrophin或同源蛋白utrophin的C末端相连,dystrophin/utrophin是巨大的细胞骨架蛋白,其N端和微丝F-actin相互结合,C末端除了β-dystroglycan还与多个其它蛋白如syntrophin,dystrobrevin相结合。B-dystroglycan穿膜部分和sarcoglycan复合物结合,它们共同组成一个复杂的穿膜蛋白复合物。人们通常把此复合物分三组亚蛋白复合物:(1)由α-dystroglycan、β-dystroglycan组成的dystroglycan复合物(dystrogylcan complex)。(2)多个不同的sarcoglycan及一个sarcospan组成的sarcoglycan复合物(sarcoglycan complex)(3)由dystrophin或utrophin与dystrobrevin、syntrophin组成的胞浆复合物(cytoplasmic complex)。近年来研究表明,DGC在维持细胞结构、细胞信号传导方面有重要作用。郑州大学20003届博士生论文Dystr(phin Glyeoplotein COlll〕lex在神经元性胆碱能突触中的表达和功能的研究 此复合物中蛋白的基因缺失或突变可引起多种遗传性疾病,造成肌营养不良及大脑发 育、认知障碍。如d州rophin基因或称DMD基因缺失或突变是引起儿童遗传性、进 行性、肌营养不良(Duehenne Muscular Dystrop场)的直接原因。 DGC蛋白复合物有两个特点,一是DGC复合物中多个蛋白可由不同基因编码或 一个基因产生多个蛋白剪接形式。例如:dystrophin的同源蛋白utrophin,它的整个蛋 白初级结构特别是其N末端与C末端和dystrophin极为相似,它们由不同基因编码,人 们认为它们很有可能在脊椎动物进化早期来源于同一个基因。utroPhin和dystrophin 关系密切,它们都可和DGc其它蛋白组成复合物。dystroPhin家族还包括dystrobrevin 和其各种剪切形式以及密切相关的蛋白p一勿strobrevin。syntrophin是DGC中另一个 蛋白,可由三种a一、pl一、pZ一syntrophin基因编码,三者蛋白结构相似。多种 DGC蛋 白的存在有可能为其不同功能奠定物质基础。 DGC蛋白复合物的另一个特点是,DGC蛋白多存在一个基因产生多个蛋白不同 剪接形式并在不同组织中表达,有些具有突触特异性表达。例如:在NMJ,dystrophin 的同源蛋白utrophin高度集中表达参与组成DGC,而肌膜中dystrophin是组成DGC 的重要分子。同样。一勿stobrevin一1在NMJ中高度表达,。一勿stobrevin一2在肌细胞膜 高度表达。许多实验证据己经显示这种专一性DGC在NMJ的发育、维持结构功能完 整性起重要作用。 最近几年的研究还表明。一dystobrevin在NMJ的突触后膜调节nAchR的聚集和 稳定,。一dystobrevin是DGC复合物中另一个关键成分,最初是从TorPeto Caz如rnica 电器官和nAchRs共同纯化出来的蛋白中鉴定出来,a一dystrobrevin和dystrophin, utrophin的C末端结合,与DGC的其它蛋白共同组成DGC复合物。在a一dystrobrevin 缺乏的老鼠,尽管DGC结构完整,但老鼠显示肌营养不良和NMJ不稳定,说明 a一勿strobrevin在肌肉和NMJ中不仅担任结构性角色而且有信号传导的作用。2,‘31。进 一步,a一勿strobrevin和syntrophin结合,sy咖Phin又和其它信号传导分子结合,如 nNos,从而增强a一dystrobrevin的信号传导能力。 近年来人们发现DGC中许多蛋白也表达在中枢和外周神经系统的神经元中。其 中包括dystrophin、 utrophin、dystroglyean、dystrobrevin和syntro户in。因此我们推测 在中枢和外周神经系统的突触中存在DGC复合物,扮演类似在NMJ中的作用。 目前尚无明显直接证据说明DGC在神经元性突触中的作用。第一步我们利用交 感神经节s即erior cervieal ganglia(SCG)和副交感神经节submandibular ganglia(SMG)郑州大学20003届博士生论文Dystropllin Glyc叩roteinC以nplex在神经元幽日碱能突触中的表达和功能的研究作为系统研究对象,了解DGC在神经元性胆碱能突触中的作用。采用这一系统的原因:1、这些神经节突触容易进行手术和体内遗传学研究。2、大多数神经节突触是胆碱能型。3、这些神