姜黄素水凝胶对乳腺癌MCF-7细胞抗增殖作用的研究

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乳腺癌的治疗是肿瘤领域里一个重要的课题。国内外众多研究者发现姜黄素能有效抑制癌细胞的增殖。然而姜黄素的水溶性差和生物利用率低等特性又一定程度限制了其在临床治疗方面的广泛应用。为了改善姜黄素的相关性能,本研究设计合成了一种新型的姜黄素化合物 Cur-FFE-ss-ERGD,并探讨了该化合物和它的还原物在抑制MCF-7细胞增殖方面的作用和相关机制。  目的:  合成一种新型的姜黄素小分子多肽水凝胶成胶前体因子以提高姜黄素的水溶性,然后观察姜黄素水凝胶及其成胶前体因子对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并初步分析其分子机制。  方法:  1、设计并通过固相合成法合成姜黄素小分子多肽水凝胶成胶前体因子Cur-FFE-ss-ERGD,并将其还原成姜黄素小分子多肽水凝胶Cur-FFE-SH;  2、用LC-MS分析姜黄素小分子多肽水凝胶Cur-FFE-ss-SH对姜黄素的释放能力;  3、CCK-8法检测姜黄素小分子多肽水凝胶及前体因子对乳腺癌细胞MCF-7的增殖的影响;  4、流式细胞术分析姜黄素小分子多肽水凝胶及前体因子对MCF-7细胞凋亡的影响;  5、qRT-PCR技术和Western Blot法测定Bcl-2和Bax基因的表达。  结果:  1、通过多肽固相合成法合成了姜黄素小分子多肽水凝胶成胶前体因子Cur-FFE-ss-ERGD,其分子质量为1597.72。加入还原性GSH后即可形成姜黄素小分子多肽水凝胶Cur-FFE-SH。  2、LC-MS仪测试的12小时里,姜黄素小分子多肽水凝胶Cur-FFE-SH具备对姜黄素进行缓慢释放的能力,且释放的速度一致,平均约为每小时0.08?g/mL。  3、CCK-8法检测细胞的增殖,结果显示相对对照组,姜黄素水凝胶前体和姜黄素水凝胶对MCF-7细胞的生长都有抑制作用,而且这种抑制作用呈剂量和时间依赖关系。  4、FCM检测结果表明40?mol/L的姜黄素水凝胶和姜黄素水凝胶前体作用于MCF-7细胞24h,可以促使细胞凋亡,凋亡率分别为11.84%和16.12%。  5、qRT-PCR分析显示40?mol/L的姜黄素水凝胶和姜黄素水凝胶前体在下调MCF-7细胞中Bcl-2 mRNA表达水平的同时可上调Bax mRNA的表达水平。  6、Western Blot结果显示在姜黄素水凝胶和姜黄素水凝胶前体作用于MCF-7细胞后,其Bcl-2蛋白水平下调,Bax蛋白水平上调。  结论:  合成的姜黄素多肽小分子水凝胶前体易溶于水。由姜黄素多肽小分子水凝胶前体还原而成的姜黄素多肽小分子水凝胶具有对姜黄素缓慢释放的功能。姜黄素水凝胶和姜黄素水凝胶前体对 MCF-7细胞均有显著的抗增殖的作用,亦可促进MCF-7细胞凋亡,其机制与抑制Bcl-2表达,促进Bax表达有关。
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