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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)属于巴斯德菌科(Pasteurellaceae)嗜血杆菌属(Haemophilus)。它是猪上呼吸道依附的共栖菌,在条件发生突变的情况下侵袭猪体,它主要表现为脏器的浆液性纤维素性胸膜炎、脑膜炎、心包炎和关节炎症为特征的全身性细菌疾病。该病发病率和死亡率呈显著上升趋势,已经成为全球养猪产业影响最为严重的细菌性传染病之一,给我国的养猪业也造成惨重的经济损失。本试验主要研究如下：1.在16省、市的发病猪场收集疑似HPS病料样品,共分离出168株HPS分离株,通过菌落和菌体形态、生化鉴定等试验,都符合HPS病原特性,PCR检测验证分离菌株为HPS菌株。表明副猪嗜血杆菌病原在我国猪场中普遍流行存在。2.将HPS分离株经KRG血清分型和ERIC-PCR基因分型两种方法分型,其中KRG血清分型结果4型的36株(21.43%),5型的31株(18.45%),13型32株(19.05%),占总比例的58.93%,占有毒力血清型(强毒和中等毒力血清型)比例76.74%; ERIC-PCR基因分型结果ERIC-PCR指纹图谱与标准菌株血清4型ERIC-PCR指纹图谱相同的比重为14.29%,5型比重为11.31%,13型比重为13.69%,占总数的52.98%。两种分型方法试验结果表明副猪嗜血杆菌血清4型、5型、13型菌株是我国养猪产业的流行血清型,也是猪致病或潜在致病的主要血清型。3.对分离株PT0911生物特性研究表明在TSB液体培养基中培养18h-20h活菌数达到高峰；H. parasuis在TSB液体培养基中生长,pH值由7.4降至6.2,说明此菌产酸能力很强；在对H.parasuis活菌数和OD600值统计分析发现,两者呈现线性相关y=15.244x-0.1959,回归值R2=0.9727。根据副猪嗜血杆菌的活菌数和OD600值之间的关系式和活菌数到达高峰的时间,就能够准确的掌握HPS菌液用于制备副猪嗜血杆菌灭活疫苗的最佳时间以及菌液活菌含量值。4.通过建立副猪嗜血杆菌抗体微量板凝集试验方法,优化反应条件及其敏感性,测定抗原最适工作浓度为5.0×109CFu/ml,并且具有良好的特异性和重复性。5.对2011年～2013年期间,全国18个省、市猪血清样品抗体含量检测,将检测数据统计分析,总计检测猪血清样品7414份,阳性3567份,总阳性率为48.11%。上海阳性率57.66%,最高,而贵州阳性率仅为19.29%,最低；保育猪(35d-70d)感染副猪嗜血杆菌概率达到60.49%,而哺乳仔猪(0-21d)、母猪和公猪感染副猪嗜血杆菌概率仅为2%左右；春季阳性率为46.91%,夏季阳性率为44.03%,秋季阳性率为50.15%,冬季阳性率为51.70%。试验得出我国不同地域(各省市间)、猪不同生长阶段(仔猪阶段、保育阶段、育肥阶段、母猪、公猪)和不同季节(春季、夏季、秋季、冬季)间流行情况均有所差异。6.筛选出制备疫苗的血.清4型、5型、13型强毒株,制备白油佐剂、铝胶、206及GEL佐剂三价副猪嗜血杆菌灭活疫苗,并对其安全性进行评价。评价安全后,将不同佐剂灭活疫苗分别注射豚鼠,测定抗体效价分别为28、210、26、211,使用铝胶佐剂和GEL佐剂抗体效价相对较高,在注射给仔猪,抗体效价稳定,未出现抗体效价降低的情况,经过权衡比较,铝胶佐剂更适合作为制备副猪嗜血杆菌三价灭活疫苗的佐剂。铝胶三价副猪嗜血杆菌灭活疫苗注射仔猪进行攻毒保护试验,试验结果仔猪发病率在20%以下,总体保护率达90%以上,表明铝胶灭活疫苗免疫后的仔猪对H.parasuis毒株侵袭具有良好的抵御能力。而母源抗体对仔猪的被动保护试验结果中,铝胶灭活疫苗接种的妊娠母猪生产的仔猪21日龄时其保护率在80%以上,表明接种铝胶灭活疫苗能够延缓仔猪保护性免疫力的时间,若在此阶段使用同一类型灭活疫苗注射刺激仔猪的获取保护性免疫力,仔猪保育阶段也可以抵抗副猪嗜血杆菌的侵袭。