小鼠脾脏树突状细胞的性激素和催乳素调控机制研究

来源 :南京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bin52833093
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性激素如E和 Prog 及多肽类激素 PRL 不仅在生殖和哺乳中发挥重要的作用,而且在调节正常或异常的免疫应答中也充当不可或缺的角色。目前在免疫系统的几类重要细胞都发现有这三种激素受体的表达,如T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞,而且研究也发现激素对这些免疫细胞的功能可以产生深远的影响。树突状细胞 (dendritic cells,DC)作为一种功能极其强大的抗原呈递细胞,其表面或胞内也有这三种激素受体的存在,但迄今为止,有关 E、Prog 和 PRL 对 DC 的免疫调控很少有报道。在本研究中,为了探讨E、Prog 及 PRL 对免疫系统的作用机制,运用抗小鼠 CDllc抗体包被的磁珠分选小鼠脾脏 DC (spleen dendritic cells,SDC),然后用不同浓度的17β-雌二醇 (17β-estradiol,E2)(control,1nM,0.1μM,1μM)、Prog (control,1nM,0.1μM,1μM) 及 PRL (control,0.01nM,0.1nM,1nM)处理 24hr,进而采用 MTT 法、流式细胞术及混合淋巴细胞反应检测其对SDC 活性、表型、核内 NF-κBp65、内吞作用、刺激能力和细胞因子的影响。 结果表明:(1)中浓度的 E2 提高 SDC 的活性(光吸收值从0.19±0.01上升到0.21±0.00);所有浓度的E2上调 MHC-II 分子和 CD40 的表达 (MHC-II 和 CD40 的荧光阳性细胞的百分率分别从88.62±1.40上升到93.79±0.34、从33.29±O.90上升到84.06±0.68);中、高浓度的E2降低 SDC 核内 NF-κBp65 的表达(荧光阳性细胞的百分率:control 43.39±0.10;0.1μM35.16±0.83:1μM 37.16±1.28)和吞噬能力(荧光阳性细胞的百分率:control 73.46±3.33;0.1μM 64.18±0.95;1μM 64.37±2.48);低浓度的E2提高而中、高浓度降低 SDC 的刺激能力(光吸收值:control 0.25±0.01;1nM 0.27±0.01;0.1μM 0.22±0.10;1μM0.21±0.01);在细胞因子的mRNA水平上,IL-6的表达在中浓度被上调而在低、高浓度则被下调 (IL-6与β-actin 条带宽度的比率:control 1.42±0.03;1nM 0.07±0.05;0.1μM1.84±0.09;1μM 1.09±0.07),IL-10 的含量在低、中浓度被提高而在高浓度被降低 (IL-10与β-actin 条带的宽度的比率:control 1.68±0.13;1nM 3.53±0.33;0.1μM 2.15±0.06;1μM 0.34±0.07),IL-12 和 TNF-α的含量在所有的E2处理组分别被降低和升高 (IL-12和TNF-α 与 β-actin 条带的宽度的比率的变化范围分别为:从1.85±0.05到0.41±0.04、从0.94±0.05到1.79±0.16);在蛋白质水平上,E2能显著提高的表达 (IL-6 和 IL-10 荧光阳性细胞的百分率的变化分别为:从2.01±0.15到3.81±0.32、从1.71±0.43到4.11±0.71)而对 IL-12 和 TNF-α的含量没有显著影响。(2)低浓度的 Prog 可以上调 SDC的 活性(光吸收值从0.19±0.01上升到0.21±0.01);所有浓度的 Prog 均可以上调 MHC-II 和 CD40 的表达 (MHC-II 和 CD40 荧光阳性细胞的百分率的变化范围分别为:从88.62±1.40到94.35±0.61、从33.29±0.90到73.83±0.95)而降低CD54的表达(荧光阳性细胞的百分率的变化范围:从20.24±1.14到15.45±0.75);高浓度的Prog可以降低SDC核内NF-KBp65的水平(荧光阳性细胞的百分率从24.96±0.24降低到20.32±0.44);Prog下调SDC的吞噬能力(荧光阳性细胞的百分率从73.46±3.33降低到56.70±6.43)而上调其刺激T细胞增殖的能力(光吸收值的变化范围:从0.25±0.01上升到0.284±0.01);在细胞因子的mRNA水平上,Prog在中浓度增加IL-6的表达而在低、高浓度降低其表达(IL-6与β-actin条带宽度的比率:control 1.42±0.03;1nM 0.88±0.03;0.1μM 1.81±0.14;1μM0.66±0.07),IL-10的水平在低、中浓度被上调而在高浓度被下调(IL-10与β-actin条带宽度的比率:control 1.514±0.05;1nM 2.074±0.23;0.1μM 3.30±0.22;1μM 0.20±0.04),Prog可以分别上调和下调IL-12和TNF-α(IL-12和TNF-α与β-actin条带的宽度比率的变化范围分别为:从0.33±0.06到1.52±0.08、从0.94±0.05到0.41±0.05);在蛋白质水平上,Prog可以上调IL-6和IL-10的水平(荧光阳性细胞的百分率的变化分别为:从2.01±0.15到4.44±0.21、从1.714±0.43到4.67±0.42)而对IL-12和TNF-α的影响不明显。(3)PRL上调SDC的活性(光吸收值从0.30±0.03上升到0.36±0.02)和表面分子MHC-II和CD40的表达(MHC-II和CD40荧光阳性细胞的百分率的变化范围分别为:从88.62±1.40到93.264±1.41、从33.29±0.90到71.17±0.62)而下调CD54的表达(荧光阳性细胞的百分率的变化范围为:从20.24±1.14到16.21±0.44);PRL降低SDC核内NF-kBp65的表达水平(荧光阳性细胞的百分率从78.84±0.57降低到67.59±0.71)及吞噬能力(荧光阳性细胞的百分率从73.46±3.33降低到57.23±3.46);PRL提高SDC的刺激T细胞增殖的能力(光吸收值的变化范围:从0.253±0.007上升到0.277±0.018);在细胞因子的mRNA水平上,低、中浓度的PRL可以上调IL-6(IL-6与β-actin条带宽度的比率:control 1.37±0.14:0.01nM 3.17±0.14;0.1nM 2.24±0.20;1nM 0.183±0.03)和IL-10(IL-10与β-actin条带宽度的比率:control 0.68±0.06;0.01nM 3.80±0.52;0.1nM 2.30±0.19;1nM 0.12±0.02)的水平而高浓度则降低;PRL可以上调SDC IL-12水平(IL-12与β-actin条带宽度的比率的变化范围:从0.33±0.04上升到1.91±0.05);低浓度的PRL升高而中、高浓度则降低TNF-α的表达(TNF-α与β-actin条带宽度的比率:control 0.85±0.15;0.01nM 1.52±0.11:0.1nM 0.66±0.08;1nM 0.56±0.06);在蛋白质水平上,所有浓度组的PRL均可增加SDC胞内IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α的水平(IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α的荧光阳性细胞的百分率的变化范围依次为:从2.01±0.15到5.64±0.52、从1.71±0.43到6.40±0.57、从7.66±0.66到10.36±0.62和从8.77±0.63到10.23±0.28)。 结论:E2、Prog及PRL可能通过影响SDC的活性、成熟及功能进而调控机体正常或异常的免疫应答。
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