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1目的1.1前期导师课题组对男性Wilson病伴生殖系统损害患者进行大样本证候调查发现其主要中医证候为肾虚、痰湿及血瘀。本研究在其基础上,以男性Wilson病伴生殖系统损害患者为研究对象,观察补肾化痰祛瘀方对男性Wilson病伴生殖系统损害患者生殖激素水平的影响。1.2通过动物实验观察Wilson病雄性TX小鼠下丘脑及垂体组织形态结构及性激素水平的变化,并研究补肾化痰祛瘀方是否对Wilson病雄性TX小鼠下丘脑及垂体组织具有一定的保护作用及对性激素水平的影响,以期为中医药治疗男性Wilson病伴生殖系统损害提供实验理论依据。2方法2.1临床研究选取2020年10月至2021年11月就诊于安徽中医药大学第一附属医院脑病中心的40例合并有生殖系统损害的男性Wilson病患者,随机分为对照组及治疗组,每组20例。对照组予以常规保肝排铜等西药治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用补肾化痰祛瘀方中药治疗。观察两组患者治疗前后卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)及睾酮(T)水平的变化。2.2实验研究经基因检测后选取纯合型雄性TX小鼠30只,另选取野生型雄鼠15只为正常对照组,在SPF级实验室环境下,喂养至12周龄后,将30只雄性TX小鼠随机分为Wilson病模型组、补肾化痰祛瘀方组,每组15只。给药组给予补肾化痰祛瘀方灌胃,正常对照组及Wilson病模型组则分别给予等体积生理盐水,均于每日上午执行一次,连续28天。运用HE染色法观察下丘脑及垂体组织病理形态结构变化;通过电镜观察下丘脑中神经元及垂体促性腺激素细胞超微结构的改变;运用免疫组化法检测下丘脑组织中Gn RH的表达;ELISA法检测血清FSH、LH、T水平。3结果3.1临床研究结果(1)治疗前两组FSH、T水平差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,治疗后两组FSH、T水平均升高(P<0.05);治疗后组间比较,治疗组较对照组升高更明显(P<0.05)。(2)治疗前两组PRL、E2水平差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,治疗后两组PRL、E2水平均降低(P<0.05);治疗后组间比较,治疗组较对照组降低差异无统计学意义(P>0.05)。3.2实验研究结果3.2.1补肾化痰祛瘀方对雄性TX小鼠下丘脑及垂体组织形态学的影响(1)下丘脑组织HE染色:正常对照组可见下丘脑神经细胞大小形态正常,呈圆形,细胞核完整,结构清晰,内容物均匀不透明。对比正常对照组,Wilson病模型组下丘脑神经细胞出现肿胀现象。而补肾化痰祛瘀方组下丘脑神经细胞肿胀程度轻于Wilson病模型组。(2)垂体组织HE染色:正常对照组可见组织结构正常,细胞排列整齐紧密,形态正常,分布均匀。对比正常对照组,Wilson病模型组细胞排列紊乱,组织结构松散、水肿。而补肾化痰祛瘀方组细胞排列尚整齐,组织疏松程度较模型组减轻。3.2.2补肾化痰祛瘀方对雄性TX小鼠下丘脑神经元及垂体促性腺激素细胞超微结构的影响(1)下丘脑神经元超微结构:与正常对照组相比,Wilson病模型组可见神经元核糖体颗粒大量丢失,细胞器明显减少、结构破坏消失,线粒体肿胀出现空泡化、嵴消失。与Wilson病模型组相比,补肾化痰祛瘀方组神经元可见核糖体颗粒增多,线粒体结构有所恢复,仍有部分出现异常变性,嵴断裂,可见高尔基体。(2)垂体促性腺激素细胞超微结构:与正常对照组相比,Wilson病模型组促性腺激素细胞出现核固缩,异染色质边集,线粒体肿胀明显,内部嵴断裂,粗面内质网断裂、扩张。与Wilson病模型组相比,补肾化痰祛瘀方组促性腺激素细胞可见正常线粒体数目较模型组增多,仍可见少量线粒体空泡变性、嵴消失,粗面内质网轻度扩张。3.2.3补肾化痰祛瘀方对雄性TX小鼠下丘脑组织Gn RH表达及平均光密度水平的影响与正常对照组比,Wilson病模型组小鼠下丘脑组织Gn RH阳性表达及平均光密度水平明显降低(P<0.01);与Wilson病模型组对比,补肾化痰祛瘀方组Gn RH阳性表达及平均光密度水平显著升高(P<0.01)。3.2.4补肾化痰祛瘀方对雄性TX小鼠血清FSH、LH、T水平的影响与正常对照组比,Wilson病模型组小鼠血清FSH、LH、T水平均降低(P<0.01);与Wilson病模型组相比,补肾化痰祛瘀方组血清FSH、LH、T水平均升高(P<0.01)。4结论4.1补肾化痰祛瘀方可改善男性Wilson病伴生殖系统损害患者血清中FSH、T水平。4.2 Wilson病雄性TX小鼠存在下丘脑及垂体组织形态及超微结构损害,且其下丘脑组织Gn RH表达水平及血清FSH、LH、T水平降低,表明下丘脑-垂体-睾丸轴调节功能紊乱。4.3补肾化痰祛瘀方对Wilson病雄性TX小鼠下丘脑及垂体组织损伤具有一定保护作用,可能是通过增加其下丘脑组织Gn RH表达水平及血清FSH、LH、T水平,从而调节下丘脑-垂体-睾丸轴的功能。