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树鼩是一种酷似松鼠,跟人类有较近的亲缘关系的哺乳纲攀鼩目动物。因其体型较小、容易驯养、且繁殖周期较短、饲养成本低等优势,树鼩慢慢地被人类用于多种感染性疾病模型的建立,如乙型肝炎病毒感染模型、肠道病毒EV71型感染模型等。目前,针对树鼩免疫系统,特别是一些免疫相关分子的研究较少,这严重阻碍了树鼩作为一种理想的感染动物模型的进一步应用。而在病毒感染过程中,CD4分子作为T细胞受体识别抗原复合物,在抗感染免疫中发挥重要的作用；同时关于树鼩CD4蛋白的表达以及抗体的制备尚未有文献报道。因此,本实验首先对CD4蛋白进行了序列分析,同时完成了树鼩CD4蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备。本文通过分离树鼩的外周血淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,经RT-PCR扩增得到带有酶切位点的CD4序列。并将树鼩CD4基因插入质粒pGEX-5X-1和pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-CD4和pET-30a (+)-CD4,分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,并纯化带有GST标签和His标签的CD4重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以GST-CD4作为免疫原,并与不同的佐剂(MF59、 Al(OH)3、弗氏佐剂)组合免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体。通过间接ELISA法检测血清抗体效价,同时根据各组血清抗体效价来比较不同佐剂对CD4蛋白诱导的抗原特异性体液免疫应答的增强效应。通过Western blot方法检测多克隆抗体与体外原核表达的CD4重组蛋白和各种属(树鼩、人、猴、大鼠和小鼠)体内的CD4蛋白的结合能力。经过以上实验,获得了重组表达质粒pGEX-5X-1-CD4和pET-30a (+)-CD4;表达的GST-CD4为可溶性表达,而His-CD4蛋白以包涵体形式存在,两种重组蛋白GST-CD4和His-CD4相对分子质量分别约为70000和53500,纯化后蛋白浓度分别为1mg/ml和600μg/ml;免疫后,三组佐剂均能诱导产生抗体,且抗血清效价较高,其中弗氏佐剂组的ELISA效价最高能达到1：163840；三组佐剂的抗血清几何平均滴度的比较结果为：弗氏佐剂组(GMT:97420)>Al(OH)3佐剂组(GMT:67202)>MF59佐剂组(GMT.55128)；其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P<0.001); Al(OH)3组显著高于原蛋白组妒<0.01)；而MF59组显著高于原蛋白组(P<0.05)；制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白,且无种属交叉反应。综上所述,本实验获得了树鼩的CD4蛋白,并且制备得到了特异性较好,且无种属交叉反应的树鼩CD4蛋白多克隆抗体；为下一步本科室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础。