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目的:乳腺癌是导致女性癌症患者死亡的第二大主要原因,它的发生和进展与多种信号通路和转录因子相关。有报道指出抑癌基因的甲基化和microRNA(miRNA)的异常表达参与了肿瘤的发生与发展,其中DNMT1作为甲基转移酶在包括乳腺癌在内的数种肿瘤中表达水平升高,miR-142-5p作为miRNA成员在多种肿瘤中表达失常。DNMT1在乳腺肿瘤的发生发展中起到了什么作用?miR-142-5p与DNMT1是如何相互作用,影响乳腺癌细胞的增殖和迁移的?本研究将从与乳腺癌迁移和增殖相关的信号通路和转录因子进行探讨,阐明乳腺癌发生发展机制,为寻找新的生物标志物和治疗靶点提供新方向。本文围绕MKL-1/miR-142/DNMT1/maspin信号通路调控乳腺癌细胞的迁移和增殖展开研究。方法:用分子生物学方法构建MKL-1的表达质粒pcDNA3.1-MKL-1,以及荧光素酶报告基因质粒pGL-3-miR-142-5p-WT-LUC、pGL-3-miR-142-5p-MUT-LUC、pmirGLO-DNMT1-WT-3′UTR-LUC和pmirGLO-DNMT1-MUT-3′UTR-LUC。在乳腺癌细胞中敲降DNMT1,通过划痕、Transwell实验验证DNMT1对乳腺癌细胞迁移能力的影响。在乳腺癌细胞中转染miR-142-5p模拟物和抑制剂,通过划痕和Transwell实验验证miR-142-5p对乳腺癌细胞迁移能力的影响;通过CCK-8、EdU、流式细胞术验证miR-142-5p对乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。利用荧光素酶报告基因活性分析试验,验证miR-142-5p和DNMT1的3’UTR的结合情况以及MKL-1和miR-142-5p启动子的结合情况。利用小鼠成瘤技术验证miR-142-5p在体内对肿瘤生成和进展的影响。利用实时荧光定量PCR技术分析miR-142-5p、DNMT1、maspin的RNA表达水平。通过Western Blot技术分析MKL-1、DNMT1、maspin的蛋白表达水平。结果:以下结果均由上述实验方案得到:敲降DNMT1能够抑制乳腺癌细胞的迁移,而过表达miR-142-5p也能够抑制乳腺癌细胞的迁移、增殖和细胞周期G1期进程,荧光素酶报告基因活性分析实验证明miR-142-5p能够靶向结合DNMT1的3’UTR区域抑制DNMT1的翻译进而影响了乳腺癌细胞的迁移。MKL-1通过作用于miR-142-5p启动子上的结合位点促进其转录活性从而抑制乳腺癌细胞的迁移增殖,DNMT1可以作用于抑癌基因maspin抑制其表达从而促进乳腺癌的发生。MKL-1/miR-142/DNMT1/maspin信号通路通过调控乳腺癌细胞的迁移和增殖进而影响乳腺癌的发生发展。结论:以上结果证明MKL-1/miR-142-5p通路的激活抑制了DNMT1的表达,而miR-142-5p通过与DNMT1的3’UTR区域互相结合干扰DNMT1的表达,并上调DNMT1下游靶基因maspin的表达,MKL-1/miR-142-5p促进了DNMT1介导的maspin调控乳腺癌细胞迁移和增殖,这些发现阐明了乳腺癌分子发病机制,对发现新的分子标志物和治疗靶点有积极意义,本研究为开发抗乳腺肿瘤转移药物提供了新的研究思路。