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本试验分别以陇东苜蓿茎尖生长点和下胚轴为外源基因受体材料，进行Lyz-GFP双元基因在苜蓿中的转化和表达的研究。首次在苜蓿中探索性地尝试了农杆菌介导漩涡振荡侵染法转基因新技术，建立了相应的转化程序。分别研究了农杆菌介导的常规转化过程和漩涡振荡茎尖生长点转化过程中若干因素对陇东苜蓿转化苗再生的影响，确定了适宜的农杆菌侵染时间和最适抑制剂浓度，并提出了消除再生苗玻璃化现象的措施。着重对通过漩涡振荡转化法获得的转化苗进行了荧光检测和PCR扩增，初步证明了通过该转化方法Lyz-GFP双元基因已经成功转入陇东苜蓿中，证实了在活体条件下对植物分生组织进行转基因是可行的。主要研究内容及结果如下：1．农杆菌介导的陇东苜蓿转Lyz-GFP双元基因的转化体系的建立。以培育5~7d的陇东苜蓿下胚轴为外植体，以传统的农杆菌介导法进行Lyz-GFP双元基因的转化，系统研究了菌液浓度，侵染时间，Kan浓度以及抑菌素浓度对陇东苜蓿再生的影响。结果表明：陇东苜蓿愈伤阶段Kan选择压为60mg/L，分化阶段Kan选择压为70mg/L；适宜的菌液浓度为0.5~0.6；抑菌素选择Cef较好，浓度为250mg/L。分析和探讨了分化阶段再生苗的玻璃化现象，提出了相应的解决办法。在光照强度为1000～1200Lx条件下，MS培养基中添加2.0mg/L6-BA和0.5mg/LNAA，调整蔗糖浓度为20~25g/L、琼脂浓度为7g/L时可有效降低陇东苜蓿再生苗玻璃化现象。2．基于漩涡振荡茎尖生长点转化法的陇东苜蓿基因转化体系的建立。以陇东苜蓿2~3d去子叶无菌苗为试验材料，以农杆菌菌液和灭菌石英砂为媒介，进行了Lyz-GFP的双元基因转化。适宜的侵染时间以30min为宜，抑菌素选择Cef，浓度为250mg/L，Kan的筛选浓度为70mg/L，1.0mg/LIBA浓度作为陇东苜蓿诱导生根激素浓度，选择营养土与蛭石1：3的体积配比为移栽陇东苜蓿试管苗的基质配比。3．转化苗的荧光检测和PCR鉴定。选取相同数量的50株转化苗进行荧光检测，在通过漩涡振荡获得的转化苗中检测到3株植株有明显的荧光蛋白表达；而通过组培获得的转化苗均未检测到荧光表达。对荧光表达植株进行PCR检测，在其中1株中检测到750bp的片段，证明Lyz-GFP双元基因已经成功转入陇东苜蓿。从而为利用茎尖生长点进行基因的转化摸索出一套快速，新型的可行方法。