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目的足细胞的裂孔隔膜(slit diaphragm,SD)是肾小球选择性滤过功能中最重要的部分,CD2相关蛋白(CD2-associated protein ,CD2AP)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)、nephrin、podocin等重要的裂孔隔膜分子共同组成一个信号传导复合物以维持足突和裂孔隔膜结构和功能的完整性。本研究借助小鼠肾小球足细胞系,观察嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激足细胞,及给予地塞米松(dexamethasone,DEX)干预后,足细胞分子CD2AP、TRPC6表达及分布的变化,探讨地塞米松对足细胞的保护作用及CD2AP、TRPC6与足细胞损伤修复的相关性。方法1、条件永生型小鼠足细胞系(mouse podocyte clone 5,MPC5)培养:复苏MPC5细胞,于33℃培养箱中增殖培养,平均3～4天细胞增殖至培养瓶底达80%,传代,置于37℃中培养,约10～14天分化成熟,此时为分化态的MPC5,可用于实验。2、设立对照组、PAN刺激组和DEX干预组。对照组用含0.02% DMSO的RPMI 1640培养液培养,PAN刺激组在细胞培养液中加入PAN,DEX干预组在细胞培养液中同时加入PAN和DEX,处理后8h,24h和48h观察细胞形态并摄相,采用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差别。采用RT-PCR、Western blot和间接免疫荧光染色检测各时间点CD2AP和TRPC6 mRNA、蛋白表达量及分布变化。结果1、正常情况下,足细胞在33℃含有γ-干扰素的培养液中生长,生长速度较快,细胞排列紧密,小而突起,呈鹅卵石样,足突样结构少见;在37℃无γ-干扰素的培养液中生长,生长速度明显减缓,足细胞呈星形,胞体多透明,大并伸出树枝样突起,相邻细胞间形成相互连接。PAN刺激后足细胞胞体明显缩小(P<0.05),出现足突回缩、消失,失去细胞间连接,DEX干预后细胞胞体明显大于刺激组(P<0.05),大部分足细胞维持正常的足突形态。2、正常情况下,CD2AP mRNA和蛋白在足细胞有一定量表达。与对照组比较,PAN损伤细胞后8h,CD2AP mRNA表达明显下降(P<0.05),一直持续至刺激后48h。CD2AP蛋白在PAN刺激8h,其表达无明显变化,在PAN刺激24h和48h后,其蛋白表达显著下降(P<0.01)。与PAN刺激组相比,DEX干预后8h CD2APmRNA表达无明显变化,24h及48h时mRNA表达显著升高(P<0.05),趋向于正常水平。DEX干预8h、24h和48h,CD2AP蛋白表达明显增多,趋于正常(P<0.01)。3、正常情况下,TRPC6蛋白在足细胞有一定量表达。与对照组比较,PAN损伤细胞后8h,TRPC6蛋白表达无明显变化,在PAN刺激24h和48h后TRPC6蛋白表达显著增高(P<0.01);地塞米松干预后8h,TRPC6蛋白表达无明显变化,干预24h后,TRPC6蛋白表达下降,趋于正常(P<0.05),48h后表达显著下降(P<0.01)。4、CD2AP在对照组均匀分布于细胞核膜、细胞浆及细胞膜;PAN刺激8h后,呈颗粒状分布于细胞浆和核周,刺激48h后出现胞膜、胞浆分布缺失;DEX干预后各时间点CD2AP在胞膜、胞浆的分布缺失较PAN刺激组明显改善,干预48h后,CD2AP在足细胞分布未达完全恢复正常,胞浆尚有少量颗粒样分布。5、TRPC6在对照组呈线状均匀分布于胞膜,在胞质内少量分布;PAN刺激24h后TRPC6主要沿细胞膜呈不连续性分布,胞质内分布增多;刺激48h后,细胞膜分布增多,部分细胞膜分布缺失,聚集成颗粒状,胞质内广泛分布。DEX干预后各时间点TRPC6在细胞膜分布较均匀,在整个细胞的分布较前明显改善,趋于正常。结论PAN刺激足细胞损伤时,足细胞结构受损,CD2AP、TRPC6表达和分布异常;DEX作用于足细胞后,CD2AP、TRPC6表达和分布趋于稳定正常,DEX可能通过维持裂孔隔膜结构和功能的完整,发挥保护足细胞和抗蛋白尿的作用。