论文部分内容阅读
光致电化学分析法是在光照下,利用被测物质与光电化学反应过程之间的相关性,诱发光生电子在分析物和电极之间的转移,通过直接或间接检测光电流,实现对被测物质浓度的检测。光致电化学分析法综合了光化学和电化学两种检测方法的优点,因其操作简单、背景电流低、成本低廉和灵敏度高等优点,成为目前分析化学研究的热点,并被应用在生命科学的研究中。光致电化学分析法的关键是借助光电材料建立一个对被测物质敏感的光致电化学系统。本文将氧化石墨烯(GOx)修饰在ITO电极表面,然后将具有光电活性的耐尔蓝(Nb)电聚合在修饰有GOx的ITO电极上,构建了同时具有光电活性和电子受体功能的PNb-GOx纳米复合界面。该界面能与电子供体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)发生光致电化学反应。由于NADH是多种脱氢酶的辅酶,通过检测NADH,可以间接测定底物浓度或酶活力。基于PNb-GOx光电敏感界面的构建,本文做了以下三个方面的研究:1.将制备的PNb-GOx/ITO光电极作为工作电极构建了光致电化学传感器,基于光电极对NADH的光致电化学响应,通过检测光电流实现了对NADH的定量分析。文中探讨了光电化学敏感界面对NADH的响应机理,讨论了偏压、电解液pH、光照强度对光致电化学反应和测定NADH的影响。在优化的实验条件下,光电流随NADH浓度的增加而增大,与0.01~80.0 μmol/L NADH浓度的对数值成正比,其回归方程为I(nA)=404.7+81.761gC(μmol/L),相关系数为0.993,检出限为5 nmol/L(S/N=3),相对标准偏差(n=5)为2.75%。2.基于乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸和NAD+反应会生成NADH,利用光电界面与生成的NADH发生光致电化学反应而产生的光电流,实现了LDH催化活性的检测。探讨了光致电化学响应原理及偏压、电解液pH值、NAD+和底物浓度对测定LDH催化活性的影响。通过测定商品LDH的催化活性,验证了方法的可行性,发展了光致电化学测定蛋白质催化活性的方法。3.将壳聚糖作为膜材料,戊二醛作为交联剂,将LDH固定在光电极表面上,制备了一种新型光致电化学乳酸传感器。该传感器偶联了酶促反应和光致电化学反应,通过光电流的检测实现了对乳酸浓度的测定。通过实验优化了酶的固定量,涂膜液用量,壳聚糖和戊二醛的浓度等传感器的制备条件。研究结果表明,乳酸传感器光电流的大小正比于乳酸的浓度,在1.00~100 μmol/L的范围内呈现良好的线性关系,其回归方程是I(nA)=233.12+1.22 C(μmol/L),相关系数为0.992,检出限为0.5μmol/L(S/N=3),相对标准偏差(n=5)为2.26%。