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本研究选取Alcalase碱性内切蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、As1.398中性蛋白酶、复合蛋白酶和复合风味蛋白酶水解大豆分离蛋白制备抗氧化活性肽。通过大豆蛋白水解液体外抗氧化活性测定实验筛选出了水解液抗氧化性较高的蛋白酶,并通过正交实验优化了其水解大豆分离蛋白的最适反应条件。在确定出的最适反应条件下,比较这些蛋白酶在不同水解时间下水解大豆分离蛋白得到的水解物的抗氧化活性大小,筛选出最佳水解酶,确定了其水解大豆分离蛋白的最佳条件,在最佳水解条件下测定了在不同水解时间下的水解物的抗氧化活性和水解度关系,并与不同添加量的Vc、BHT、BHA的抗氧化活性做比较。最后通过动物实验,测定了小鼠肝脏中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)的含量。实验结果表明:
从6种蛋白酶中筛选出水解大豆蛋白能够产生高抗氧化活性肽的蛋白酶为Alcalase碱性内切蛋白酶,其优化的水解大豆蛋白的条件:T=55℃,pH=7.5,E/[S]=5%,[S]=4.5%。
随着时间的延长Alcalase碱性内切蛋白酶水解液的水解度一直在增加,但水解液的抗氧化活性是先增大后减小,水解度为9.98%时的水解液体外抗氧化活性最高,其亚油酸过氧化抑制率和清除氧自由基活力分别为28.4%和46.5%,均出现在水解3h处。其清除氧自由基活力分别是添加量为0.20‰、0.16‰和0.12‰Vc清除氧自由基活力的1.08倍,4.74倍和14.1倍,而水解物亚油酸过氧化抑制率不如BHT和BHA。
动物实验结果表明:除了对于指标CAT活力,低剂量组和标准饲料对照组之间不存在显著性差异外(P>0.05)其他各指标与对照组之间均具有非常显著性差异(P<0.01),由此可以看出,Alcalase碱性内切蛋白酶水解大豆蛋白得到的水解液具有体内抗氧化活性。