论文部分内容阅读
本文以出自《太平惠民和剂局方》的中成药名方藿香正气水作为研究对象，采用层次化的研究策略，从化学成分群到化学单体成分逐步研究藿香正气水肠道解痉的药效物质基础，并采用适宜的分析手段建立其质量控制方法。主要研究内容包括：1.研究藿香正气水对大鼠离体结肠的解痉作用。以对KCl刺激大鼠离体结肠的收缩张力为指标，观察藿香正气水肠道内容物对KCl刺激大鼠离体结肠的抑制作用，确定藿香正气水肠道内容物最佳药效提取时间为25min。把12批藿香正气水肠道内容物对KCl刺激大鼠离体结肠的抑制率和液相色谱指纹图谱所得化学数据相结合，运用SPSS统计软件进行相关分析，并与藿香正气水体外指纹图谱进行对比，确定出藿香正气水肠道解痉的五个药效成分。2.在液相色谱指纹图谱中的药效成分的指导下，采用植物化学方法对藿香正气水三氯甲烷萃取部分的化学成分进行系统研究，从中分离得到15个化合物：甘草苷（1）、甘草素（2）、异甘草素（3）、芒柄花素（4）、水合氧化前胡素（5）、白当归素（6）、橙皮苷（7）、5,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮（8）、5,6,7,3′,4′-五甲氧基黄酮（9）、5,7,8,4′-四甲氧基黄酮（10）、川陈皮素（11）、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮（12）、桔皮素（13）、和厚朴酚（14）与厚朴酚（15）。化合物为下一步的药效研究及质量控制提供了物质基础。3.研究藿香正气水中含量较大的化学成分桔皮素、川陈皮素、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚、异甘草素、甘草素和甘草苷在不同浓度时对KCl、乙酰胆碱或磷酸组胺引起离体肠平滑肌收缩的影响。结果表明桔皮素、川陈皮素、和厚朴酚、厚朴酚、甘草苷、异甘草素和甘草素对KCl、乙酰胆碱或磷酸组胺引起离体肠平滑肌收缩有抑制作用，呈一定的量效关系。研究初步确定了藿香正气水肠道解痉的多种药效成分。4.在中国药典规定的指标性成分橙皮苷含量测定方法的基础上，建立了高效液相色谱法同时测定藿香正气水中甘草苷、橙皮苷、水合氧化前胡素和白当归素含量的方法。采用Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），0.03%醋酸水溶液-乙腈-甲醇为流动相；梯度洗脱；流速1.0mL·min-1；检测波长276nm。甘草苷、橙皮苷、水合氧化前胡素和白当归素进样量分别在0.00866～0.17325μg、0.0734～1.46793μg、0.01384～0.13838μg和0.00528～0.10553μg范围内与峰面积的线性关系良好（r≥0.9998）。平均加样回收率分别为100.7%（RSD=1.5%）、99.1%（RSD=0.5%）、98.5%（RSD=1.9%）和100.4%（RSD=1.8%）。样品前处理操作简便、重复性强，可作为控制该制剂内在质量的补充方法。5.在中国药典规定的指标性成分厚朴酚与和厚朴酚含量测定方法的基础上，建立了高效液相色谱法同时测定藿香正气水中5,7,8,4′-四甲氧基黄酮、川陈皮素、桔皮素、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素和厚朴酚含量的方法。采用Gracesmart C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），0.05%甲酸水溶液-乙睛为流动相；梯度洗脱；流速1.0mL·min-1；检测波长280nm。5,7,8,4′-四甲氧基黄酮、川陈皮素、桔皮素、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素和厚朴酚进样量分别在0.00238～0.11875μg、0.00910～1.45664μg、0.00353～0.77550μg、0.01770～0.35400μg、0.28504～4.47920μg、0.00516～0.24080μg和0.23560～4.71200μg范围内与峰面积的线性关系良好（r≥0.9998）。平均加样回收率分别为100.7%（RSD=0.9%）、99.7%（RSD=2.4%）、100.7%（RSD=2.4%）、101.0%（RSD=1.7%）、98.8%（RSD=2.4%）、101.8%（RSD=2.5%）和101.3%（RSD=1.5%）。根据藿香正气水肠道解痉的药效成分，建立其质量控制方法。