【摘 要】
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目的:CAR-T细胞疗法作为肿瘤免疫治疗的一种有效方案,能特异性识别并结合肿瘤相关抗原,发挥抗肿瘤活性。CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤上已获得巨大成功,各类实体瘤上的应用也在不断的探索。目前全球已经有超过300多项CAR-T相关临床试验正在进行,在各类临床试验中,CAR的结构被尝试进行改进,以提高抗肿瘤活性和安全性。现已经有2种CD19 CAR-T已经被FDA(Food and Drug Adm
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目的:CAR-T细胞疗法作为肿瘤免疫治疗的一种有效方案,能特异性识别并结合肿瘤相关抗原,发挥抗肿瘤活性。CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤上已获得巨大成功,各类实体瘤上的应用也在不断的探索。目前全球已经有超过300多项CAR-T相关临床试验正在进行,在各类临床试验中,CAR的结构被尝试进行改进,以提高抗肿瘤活性和安全性。现已经有2种CD19 CAR-T已经被FDA(Food and Drug Administration,美国食品药品监督管理局)批准上市,而国内仍处于临床试验阶段。CAR-T细胞治疗在临床上的应用前景广泛,但CAR-T细胞制备过程复杂,价格高昂,限制了CAR-T细胞治疗的推广和应用。本研究尝试构建CD3特异性慢病毒载体,在体内针对CD3+T细胞群,表达CAR,产生效应性CAR-T细胞,从而极大简化了CAR-T体外生产流程,为CAR-T细胞的推广提供一种可能,同时也是通用型CAR-T细胞的一种解决方案。本研究构建了一种慢病毒载体模型,能特异性的结合携带有相应抗原的细胞,稳转并表达目的基因序列,是一种兼具灵活性和稳定性的基因编辑工具。方法:本研究通过对二代LV(lentiviral vector,慢病毒载体)三质粒体系中决定LV感染能力的假型化包膜蛋白质粒p-CMV-VSVG进行改造。首先寻找合适的酶切位点,切除VSVG片段,回收剩余的线性载体质粒片段p-CMV-VSVG(SalⅠ、BglⅡ)。然后合成含改造后的麻风病毒血凝素蛋白DNA序列的质粒,这种改造后的麻风病毒血凝素蛋白适用于LV假型化,并且不结合其天然配体CD46和SLAM(signaling lymphocyte activation molecule,淋巴细胞信号活化分子)的能力。设计合适的引物,在DNA序列后加入适当长度的linker片段(G4S)3,通过PCR获得线性DNA片段H-(G4S)3。利用实验室已有的含CD3特异性单链抗体DNA片段的质粒,设计合适的引物,通过PCR获得线性CD3特异性单链抗体DNA序列OKT3。上述各线性DNA片段前后都有20bp的同源序列。利用Overlap PCR技术将H-(G4S)3和OKT3连接,获得线性DNA片段H-(G4S)3-OKT3。最后利用同源重组技术,将线性载体质粒片段p-CMV-VSVG(SalⅠ、BglⅡ)和H-(G4S)3-OKT接合,获得质粒p-CMV-Hm O。测序验证无误后,利用二代LV三质粒包装体系,包装生产CD3特异性LV。CD3特异性LV分别感染不表达CD3的293T细胞和稳定表达CD3的Jurkat细胞,检测其特异性感染能力和表达情况。结果:本研究成功构建了新的LV包膜蛋白质粒p-CMV-Hm O,利用p-CMV-Hm O代替原有的包膜蛋白质粒p-CMV-VSVG,生产出能特异性的感染CD3+细胞的慢病毒载体,并能稳定表达载体质粒中的目的基因序列。结论:利用p-CMV-Hm O,我们能生产CD3特异性LV。CD3在体内绝大多数具有生物活性的T细胞中高表达。利用这种CD3特异性LV可以在体内直接感染CD3+的T细胞,并表达CAR。这样,体内形成的CAR-T细胞再利用CAR特异性靶向肿瘤相关抗原,产生抗肿瘤杀伤活性。本研究还验证了一种慢病毒载体模型,通过改造慢病毒载体的包膜质粒,LV能特异性的靶向表达相应抗原的细胞,稳转并表达目的基因序列,是一种兼具灵活性和稳定性的基因编辑工具。
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目的:1.描述COPD患者衰弱的发生现状。2.从躯体、心理、社会层面分析COPD患者衰弱的影响因素。方法:本研究采用横断面调查法,便利抽取2019年5月~2019年12月在福建省某三级甲等综合医院、某三级甲等专科医院及某二级甲等综合医院呼吸内科门诊就诊和住院的COPD患者248例进行调查。采用自制的一般资料调查问卷、中文版TFI(Tilburg Frailty Indicator,Tilburg衰
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目的:研究通过Gerdy结节截骨外侧入路钢板合并前后拉力螺钉固定治疗后,对外侧胫骨平台骨折的治疗效果,再和Gerdy结节截骨外侧入路结合钢板疗法进行对比,为日后能够更好的治疗奠定基础。方法:回顾分析我院2015年1月-2019年1月采用Gerdy结节截骨外侧入路钢板结合前后拉力螺钉固定治疗39例胫骨平台后外侧骨折患者临床病例资料,男19例,女20例,年龄45±5.9,均为闭合性骨折,致伤原因:高处
目的评价活性氧(ROS)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在地氟烷预处理减轻脂多糖(LPS)诱导的大鼠脑急性炎症中的作用。方法健康雄性清洁级的SD大鼠168只,随机分为4组(n=42):对照组(C组)、脑急性炎症组(L组)、地氟烷预处理+脑急性炎症组(DL组)和N-乙酰半胱氨酸+地氟烷预处理+脑急性炎症组(N+DL组)。L组、DL组和N+DL组采用尾静脉注射LPS(1 mg/kg)制备大鼠
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