【摘 要】
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本研究采用腺相关病毒(AAV)与慢病毒(LV)介导基因转移技术,同时构建CMV与肌肉特异启动子(SP)双启动子真核表达载体,以期提高目的基因在肌肉组织的表达效率。首先构建了CMV-SP
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本研究采用腺相关病毒(AAV)与慢病毒(LV)介导基因转移技术,同时构建CMV与肌肉特异启动子(SP)双启动子真核表达载体,以期提高目的基因在肌肉组织的表达效率。首先构建了CMV-SP双启动子表达载体,检验其在非肌源细胞及肌源细胞中对外源基因的表达效率,结果证明双启动子载体在非肌源细胞中与CMV启动子效率相近,而在肌源细胞中明显提高,比单启动子载体均提高2倍以上。其次,生产双启动子启动的GHRH和HBsAg/SST单基因以及GHRH-HBsAg/SST双基因AAV病毒颗粒,并注射小鼠肌肉组织,结果显示AAV介导的双基因表达对小鼠的生长具有明显的促进作用,证实了GHRH与HBsAg/SST双基因共表达对动物的促生长具有协同作用。对动物血液中相关激素水平测定发现,GHRH与SST出现了拮抗作用。最后选用LV作为基因转移载体介导GHRH,观察对动物生长影响,并与AAV载体相比较,结果表明LV载体对动物生长持续性更优于AAV。本研究为寻求高效的基因表达系统,实现对GH的双向调节,开发新一代提高动物生产性能的长效促生长制剂打下了基础。
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