肝外胆管癌(通常称为胆管癌)因早期诊断困难，手术切除率低、预后差而成为胆道外科研究的热点课题之一。胆管癌是一种发病率很低的恶性肿瘤，但是近年来有升高的趋势；而且对标准化治疗(包括化学疗法，放射疗法和手术疗法)的反应较差。因此国内外的研究者对胆管癌发生发展的分子生物学机制十分关注，进行了大量的研究，而这对于胆管癌的早期诊断，综合治疗和判断预后有着重要的指导意义。 细胞增殖和凋亡失衡是肿瘤发生发展的重要机制，凋亡调节基因被认为是继原癌基因、抑癌基因之后的第三类癌基因。Survivin基因是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，IAP)基因家族的新成员。它的表达产物survivin蛋白是迄今为止分子量最小也是抗凋亡作用最强的IAP。Survivin的表达具有高度特异性，在胚胎组织高表达，而在正常成体组织，除了胎盘和胸腺之外，几乎检测不到。但是，在大多数肿瘤组织中却发现有survivin的异常高表达现象，这一特点为肿瘤诊断及治疗提供了新的靶点。但是国内、外目前有关survivin基因在胆管癌发生、发展以及预后中作用的研究报道极少。 RNA干扰是生物体保持其自身遗传性状的稳定和调控后生型突变的一种生理现象。作为一种古老的保护机制，RNAi不仅可以抵御外源有害基因入侵，而且将其作为一种解读基因功能的研究技术还可能为功能基因组学、基因治疗学等众多领域带来新的突破。因此，RNA干扰在理论上有望成为一种新的肿瘤基因治疗方案。本研究若能证实survivin基因在胆管癌的发生发展和判断预后方面有重要的作用，我们将设计以survivin基因为靶标的shRNA，试探survivin-shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响，通过沉寂survivin基因的表达，研究survi-vin在抗凋亡信号通路中相关信号分子的变化情况，从而为胆管癌的基因治疗提供新的理论基础。 第一部分:Survivin在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达和意义 一:Survivin在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中选择性高表达 目的:探讨survivin基因在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达情况，初步阐明survivin基因与胆管癌发生发展之间的关系。 结论:Survivin基因在人类胆管癌组织和细胞系中选择性高表达，survivin可能是胆管癌发生发展中的一个关键基因，提示survivin可以应用于胆管癌的病理诊断中。 二:Survivin在胆管癌细胞核中的表达提示较差的预后 目的:主要研究胆管癌患者中survivin基因表达与预后之间的关系。 结论:胆管癌中survivin的细胞核表达可以提示较差的预后；可作为一种预测指标用于恶性肿瘤的动态观察及预后判断。 第二部分:靶向Survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响 目的:探讨survivin靶序列特异性的siRNA沉寂目的基因的作用，及对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响。 结论Survivin靶序列特异性的siRNA能有效抑制目的基因的表达；在体外抑制人胆管癌细胞的生长并诱导人胆管癌细胞发生凋亡。为胆管癌的基因治疗提供一定的实验基础。 第三部分Survivin抑制人胆管癌细胞调亡的胞内信号转导通路 目的:探讨survivin抑制胆管癌细胞凋亡的信号传导通路中相关信号分子的变化。 结论:初步揭示了survivin抗凋亡的机制：凋亡抑制因子survivin可能首先p38MAPK信号分子的活化，然后抑制procaspase-9的活化而阻止caspase-3的激活，抑制肿瘤细胞的凋亡。