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脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]由载脂蛋白(a)[apolipoprotein,apo(a)]和apoB通过二硫键连接而成。高Lp(a)作为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)性心、脑血管疾病的独立危险因素已得到公认,氧化Lp(a)[oxidized lipoprotein(a),ox-Lp(a)]较天然Lp(a)更具致As作用。
目的:(1)人血清ox-Lp(a)自身抗体提取和鉴定。(2)建立两种ox-Lp(a)酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked imrnunosorbent assay,ELISA)[ox-Lp(a)1:采用ox-Lp(a)自身抗体作为捕获抗体;ox-Lp(a)2:采用多克隆抗ox-LDL抗体作为捕获抗体]。(3)探讨ox-Lp(a)水平在冠心病中的变化及其机制,评价其临床价值。(4)两种ELISA法测定结果比较。(5)探讨经皮冠状动脉干预(Pereutaneouscoronary intervention,PCI)导致天然、氧化Lp(a)水平的变化及机制。
方法:(1)采用溴化氰活化的琼脂糖凝胶sepharose4B交联ox-Lp(a)制备免疫吸附层析柱,从人血清中提取抗ox-Lp(a)自身抗体。(2)分别建立以抗ox-Lp(a)自身抗体[ox-Lp(a)1]、抗ox-LDL多克隆抗体[ox-Lp(a)2]为捕获抗体,酶标抗apo(a)为检测抗体的ox-Lp(a)ELISA检测法。(3)分析96例急性冠状动脉综合征(acutecoronary syndrome,ACS)患者,89例稳定冠脉病(coronary artery disease,CAD)患者,以及100例对照人群血浆中ox-Lp(a)水平,冠状动脉造影确认冠状动脉病变程度。(4)分别采用ox-Lp(a)1和ox-Lp(a)2两种方法检测161例ACS、114例稳定CAD患者及100例对照人群血浆ox-Lp(a)水平,分析结果问相关性、评估其临床价值,并比较两种方法的优劣。(5)分别对75例ACS患者PCI前、后、24 h、2 d、3 d和6个月后各时间点天然、氧化Lp(a),Lp(a)免疫复合物[Lp(a)immune complexes,Lp(a)-IC]和自身抗体水平进行检测。
结果:(1)经亲和层析提取了正常人血清中的抗ox-Lp(a)自身抗体,与天然Lp(a)无反应性,与ox-Lp(a)具有良好的反应性:初步验证可同时识别氧化apo(a)和apoB位点。(2)建立的两种ELISA检测法均同ox-Lp(a)具极强的免疫反应性,而同天然、丙二醛(malondialdehyde,MDA)修饰的Lp(a)的免疫反应性极低;平均批内变异系数为5.7％和6.9％,平均批间变异系数为9.2％和10.5％。(3)ACS组和稳定CAD组ox-Lp(a)水平均较对照组显著升高(P＜0.001)[ACS组:(26.29±30.63)μg/ml;稳定CAD组:(14.88±11.69)μg/ml;对照组(8.37±9.33)μg/ml],且ACS组ox-Lp(a)水平高于稳定CAD组(P＜0.01)。ACS患者多支病变组ox-Lp(a)水平较单支和双支病变组均显著升高;在稳定CAD患者中不同病变组间ox-Lp(a)水平无显著差别。ACS组ox-Lp(a)/Lp(a)比值显著高于稳定性CAD组(P＜0.05)及对照组(P＜0.001),稳定CAD组ox-Lp(a)/Lp(a)比值亦高于对照组(P＜0.05)。多因素分析显示,在ACS组中ox-Lp(a)(β=329,P=0.001)、TG水平(β=0.188,P=0.054)及年龄(β=0.191,P=0.052)共同解释15.1％的冠状动脉病变程度;Lp(a)(β=0.444,P=0.000)和冠状动脉病变程度病变程度(β=0.275,P=0.002)共同解释29.8％的ox-LICI(a)水平。(4)两种ELISA方法所测结果显著相关(r==0.864,P=0.000);逻辑回归分析显示:消除血脂、Lp(a)和临床特征的影响后,ox-Lp(a)1所测结果在ACS和稳定CAD中的相对危险度(odd ratio,OR)分别为5.06和2.20;ox-Lp(a)2所测结果在ACS和稳定CAD中的OR值分别为3.37和1.35;受试者工作特征曲线(Receiver-operating characteristic curvcanalysis,ROC)分析显示,在ACS组和稳定CAD组中ox-Lp(a)1效能均明显优于ox-Lp(a)2。(5)PCI后Lp(a)、ox-Lp(a)、Lp(a)-IC水平均较术前显著升高,自身抗体水平显著下降。PCI前、后ox-Lp(a)水平均与Lp(a)高度相关。PCI导致天然、氧化Lp(a)水平急速升高,24 h内快速下降,2～3天内接近术前水平。天然、氧化Lp(a)变化值均与冠状动脉病变程度相关。
结论:(1)提取的人血清ox-Lp(a)自身抗体可同时识别apo(a)和apoB氧化位点。(2)两种ox-Lp(a)ELISA测定法均特异性、重复性好,灵敏度高。(3)ACS和稳定性冠心病患者ox-Lp(a)水平均升高,ACS患者变化尤为显著;且ox-Lp(a)水平与ACS患者病变程度相关。(4)两种ELISA法检测结果高度相关,均可作为冠心病的预测指标,ox-Lp(a)1预测价值优于ox-Lp(a)2。(5)PCI导致天然、氧化Lp(a)水平升高,且其增加值与冠状动脉病变程度相关。