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目的：肿瘤产生多药耐药性的一个主要机制是编码P-糖蛋白的多药耐药基因MDR1。P-糖蛋白是一种能量依赖性的药物输出泵,能泵出癌细胞中的化疗药物。因基因疗法具有较少的内在毒性,所以我们认为特异性抑制P-糖蛋白表达是一种很好的逆转多药耐药的治疗方法。目前,关于脱氧核酶逆转多药耐药性作用的研究很少。在这个课题中,我们合成了作用于翻译起始密码子AUG的硫代硫酸酯脱氧核酶,并转染入具有MDR表型的乳腺癌细胞和白血病细胞中,同时也合成了作用于相同基因区域的ASODN(反义寡核苷酸)和核糖酶,并与脱氧核酶做对比分析。方法：本实验用RT-PCR,流式细胞术和Rh123滞留实验检测MDR1mRNA和P-糖蛋白的变量,用MTT比色法检测转染细胞的化学敏感性。为了比较脱氧核酶与反义寡核苷酸及核糖酶逆转多药耐药性的作用,我们将作用于翻译起始密码子的脱氧核酶,反义寡核苷酸及核糖酶分别转染入药物敏感细胞组MCF-7.K562及耐药细胞组群MCF-7/ADM、K562/ADR中,并与未转染细胞,空白对照组及非特异性脱氧核酶,反义寡核苷酸及核糖酶做对比分析,通过检测MDR1mRNA与P-糖蛋白变量及细胞内Rh123滞留量评估脱氧核酶,反义寡核苷酸及核糖酶逆转肿瘤多药耐药的作用及特异性。结果：1.在RT-PCR的分析中,MDR-1和P-actin的扩增量分别为396bp和206bp。细胞在分别转染入脱氧核酶,反义寡糖甘酸,核糖酶与mock空白对照36小时后,在5ug/ml浓度下,与未被处理的细胞组群相比较,转染脱氧核酶,反义寡糖核酸和核糖酶细胞的MDR1mRNA的表达量显著减少。没有特殊处理的对照细胞组群没有观察到任何变化。在所有的细胞组群中GSTTπmRNA的表达量均无变化。2.在流式细胞术定量测定P糖蛋白表达量的实验中,脱氧核酶能在0.5μg/ml的浓度下抑制P-糖蛋白的表达,它对P-糖蛋白的抑制作用出现在转染后12小时,并在转染后36小时达到峰值,并且脱氧核酶对P-糖蛋白的抑制作用好于核糖酶质粒和反义寡核苷酸。核糖酶质粒对P-糖蛋白表达有较长时间的抑制作用。3.我们用细胞内Rh123滞留量实验评估P糖蛋白的功能,结果显示分别转染脱氧核酶,反义寡核营酸和核糖酶36小时后,在5μg/ml的浓度下,脱氧核酶组群细胞内的Rh123滞留量显著高于反义寡核苷酸和核糖酶细胞组群。这些数据表明,转染后细胞中P-糖蛋白的泵出作用被抑制,尤其是在转染脱氧核酶的细胞组群中。4.在MTT药物敏感性实验中,我们观察到与转染入反义寡核苷酸或核糖酶的细胞组群相比,转染脱氧核酶的细胞对阿霉素或长春新碱的抗药性明显降低。对化学敏感性最好的修复作用出现在转染后36小时的脱氧核酶细胞组群中。结论：作用于翻译起始密码子AUG的脱氧核酶能逆转癌细胞的多药耐药性并能修复它们的化学敏感性。而且脱氧核酶比作用于MDR1mRNA相同区域的核糖酶和反义寡核苷酸的逆转作用更好。