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研究背景结直肠癌是最常见的肿瘤之一,发病率和死亡率较高,预后较差[l]。我国结直肠癌的发病率和死亡率在所有肿瘤中位于第5位[2]。结直肠癌的发生发展与遗传物质的改变相关,在过去的30年间,分子遗传学研究揭示了结直肠癌发病机制中的一些重要发现[3],新的癌基因和抑癌基因均参与了结直肠癌形成与进展。DNA元件百科全书计划(Encyclopedia of DNA elements, ENCODE)揭示了人类基因组中只有不到2%的基因为编码基因,其余均为非编码基因[4]。根据核苷酸长度是否大于200 nt,非编码RNA(non-protein coding RNA, ncRNA)分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和小的ncRNA。目前已发现一些肿瘤易感性与肿瘤相关基因座位上的lncRNA有关[5],lncRNA的差异表达能够影响到肿瘤的发生发展。研究目的探讨长链非编码RNA Linc00467(long intergenic non-protein coding RNA 467)和ZFAS1(ZNFX1 antisense RNA 1)在结直肠癌中的表达和生物学功能实验方法通过实时荧光定量PCR实验在11对人结直肠癌组织和癌旁正常组织中检测25条候选lncRNA在结直肠癌组织中的表达水平,确定差异表达较明显的lncRNA Linc00467和ZFAS1作为目标基因进行研究。进一步扩大样本量,在总共67对人结直肠癌组织和癌旁正常组织以及8株结肠癌细胞系和1株结肠上皮细胞系中检测Linc00467的表达水平。统计纳入的67例患者的临床病理资料,分析Linc00467的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系。通过Transwell迁移实验、MTS实验和克隆形成实验检测Linc00467对结肠癌细胞迁移、增殖和集落形成等行为的影响。在67对人结肠癌组织和癌旁正常组织以及8株结肠癌细胞系和1株结肠上皮细胞系中检测ZFAS1的表达水平。统计纳入的67例患者的临床病理资料,分析ZFAS1的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系。通过Transwell迁移实验、MTS实验和克隆形成实验检测ZFAS1对结肠癌细胞迁移、增殖和集落形成等能力的影响。敲低ZFAS1,检测ZFAS1的潜在靶基因ZNFX1 (zinc finger,NFX1-type containing 1)在结肠癌细胞系中的mRNA水平及蛋白水平的表达量。过表达ZNFX1,通过Transwell迁移实验、MTS实验和克隆形成实验检测ZNFX1对结肠癌细胞迁移、增殖和集落形成等能力的影响。截短法构建ZNFX1含有AAA结构域的基因克隆,过表达该载体后进行Transwell迁移实验、MTS实验和克隆形成实验,通过检测ZNFX1不同区段发挥功能的情况来推测哪个区段在肿瘤发生发展中起到作用。实验结果我们从组织和细胞水平证明Linc00467和ZFAS1在结直肠癌中高表达。但并没有发现Linc00467和ZFAS1的表达丰度与结直肠癌患者的临床病理特征之间存在显著相关性。通过克隆形成实验证明Linc00467和ZFAS1可以促进结肠癌细胞的集落形成能力;通过MTS实验证明Linc00467和ZFAS1可以促进结肠癌细胞的增殖能力;通过Transwell实验证明Linc00467和ZFAS1可以促进结肠癌细胞的迁移能力。ZFAS1是ZNFX1的反义转录本,两者为头对头转录。ZFAS1可以潜在调控ZNFX1的表达,敲低ZFAS1引起ZNFX1的表达量增加。ZNFX1在结肠癌细胞系中表达下调,过表达ZNFX1可以抑制结肠癌细胞的迁移、增殖和集落形成能力。实验结论Linc00467和ZFAS1在结直肠癌中高表达,可以促进结肠癌的迁移和生长。ZFAS1的作用可能与抑制其临近基因ZNFX1的表达与生物学功能相关。