蛋白酶是能将蛋白质降解为小肽和氨基酸的水解酶,碱性蛋白酶（Alkaline protease,AP）作为在碱性环境下活力较高、稳定性较好的一类蛋白酶,其在洗涤剂、生物修复、废物管理、摄影、诊断等工业中均有应用。微生物源碱性蛋白酶因生产成本低、生产率高可满足工业上的需求,成为碱性蛋白酶生产的重要来源,在微生物中,细菌和真菌是各种碱性蛋白酶的良好来源。目前,芽孢杆菌属细菌如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌等是适用于工业生产的主要产酶菌株。本文主要从自然环境中筛选出一株产酶活性较高的菌株,并对菌株中碱性蛋白酶进行了相关研究。首先,从自然发酵的大豆中分离出一株产蛋白酶活性较高的菌株BN-2,结合形态学、分子生物学鉴定该菌种为Bacillus subtilis subsp.natto BEST195。然后通过CTAB法成功提取了BN-2菌株中基因组DNA,利用PCR技术扩增出该菌株中碱性蛋白酶（Alkaline protease,AP）基因,插入pBE2R载体中,构建成重组表达载体pBE2R-AP,并转染枯草芽孢杆菌WB600进行分泌性表达。以糊精、可溶性淀粉作为碳源,每毫升发酵液中重组蛋白酶的酶活约是出发菌株中蛋白酶酶活的1.2倍。将pBE2R载体中p43启动子替换为BN-2菌株中碱性蛋白酶的p195启动子时,每毫升发酵液中p43启动子调控下的碱性蛋白酶酶活约是p195启动子调控下酶活的1.4倍。以酪蛋白为底物对该重组蛋白酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该酶的最适作用pH为8.0,在pH 8.0缓冲液中保存24 h,剩余酶活力达94%;该酶的最适作用温度为50℃,在50℃中处理30min时残余酶活力降至51%;1mmol/L的Mn²⁺使该酶活性提高了48%,1mmol/L的Ca²⁺使该酶活性提高了8%;洗涤剂组分中1%的TritonX-100对该酶活性有13%的抑制作用,1%的Tween20对该酶活性有8%的抑制作用,1%的Tween80对该酶活性有15%的抑制作用。