论文部分内容阅读
大鼠嗜碱性粒细胞(Rat Basophilic Leukaemia,RBL)是一种经典的肥大细胞模型,常用于过敏反应和IgE抗体的研究。特异性IgE抗体使RBL细胞致敏后,外来的过敏原刺激细胞快速发生脱颗粒反应,释放组胺、己糖苷酶、5-羟色胺等炎症因子,引起过敏反应。基于这一特性,设计了一种RBL细胞芯片,用于检测和鉴定病毒。 利用噬菌体展示技术筛选得到了特异性识别禽流感病毒H5N1或狂犬病毒的单区抗体(sdAb),将sdAb与小鼠IgEFc段C3ε-C4ε域融合,构建得到sdAb-Fc重组IgE抗体。抗体既能够特异性识别病毒抗原,又能结合RBL细胞表面的IgE高亲和力受体(FcRε(I))。 sdAb-Fc抗体与RBL细胞结合后使细胞致敏,病毒样品加入后,会结合多个sdAb-Fc/FcRε(I)复合物并使其在细胞表面聚集,FcRε(I)的胞内段发生磷酸化并启动信号传导通路,开启内质网的Ca2+通道,释放大量的Ca2+进入胞浆中,进一步激活下游的蛋白激酶,使细胞发生脱颗粒反应。胞浆中的Ca2+染料Fluo-4与Ca2+结合后,会发出绿色荧光。用荧光显微镜实时观察,RBL细胞可在病毒刺激后几秒钟内发出荧光信号,反应时间极短,整个检测过程可在3分钟内完成。 研究表明RBL细胞芯片能够准确识别H5N1病毒和狂犬病毒,非目的病毒不能干扰特异性识别。对H5N1病毒和狂犬病毒的检测限分别达到了103TCID50/mL和10LD50/mL,和现有的ELISA等检测技术相比,RBL细胞芯片的灵敏度在同一个范围之内,但检测时间显著缩短,可以用于传染病致病病毒的临床诊断和流行病学监测。今后可将RBL细胞和微流控芯片相结合,制成便携的活细胞芯片,用于高通量筛选和快速病原检测,促进传染病防控和过敏药物的研发。